| 【中文题名】 | 恙虫病东方体56kD表面抗原基因片段的克隆、表达及纯化抗原在恙虫病抗体检测中的应用 |
| 【英文题名】 | Cloning, Expression of Truncated 56kD Antigen Gene of Orientia Tsutsugamushi and Its Application with Purified Antigen in Antibody Detection for Scrub Typhus Infection |
| 【学科专业】 | 临床检验诊断学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2002-7-22 |
| 【中关键词】 | 恙虫病东方体,56kD抗原,克隆,蛋白表达,蛋白纯化,间接法ELISA |
| 【英关键词】 | Orientia tsutsugamushi,Sta56 antigen,Cloing,Protein expression,Protein purification,Indirect ELISA,Immunochromatographic assay, |
| 【分类导航】 | 医药、卫生>内科学>传染病>立克次（Ricketts）氏体传染病>恙虫热> |
| 【论文摘要】 |
目的：构建恙虫病东方体56kD表面抗原基因(sta56)片段的重组表达质粒，在E.coli中表达Sta56重组抗原，重组抗原纯化后应用于间接法ELISA、金标快速免疫层析法检测恙虫病东方体特异性抗体。
方法：从恙虫病东方体Karp株基因组中扩增出sta56基因的ORF及其中长1053bp的大片段，用TA克隆技术将此大片段克隆；以该重组质粒为模板，扩增出不同长度的截短的sta56片段，定向插入pPROEX HTb及pET30a载体，转化大肠杆菌DH5a或BL21(DE3)，IPTG诱导表达，应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况，应用Western blot分析重组抗原的活性；采用电洗脱、亲和层析等方法纯化重组蛋白；纯化的重组蛋白直接包被聚乙烯96孔板，用于间接法ELISA检测恙虫病东方体IgG，或以胶体金标记重组抗原，运用金标快速免疫层析法检测恙虫病东方体IgM和IgG抗体。
结果：
1．从恙虫病东方体Karp株基因组中扩增出含sta56基因的ORF，并成功构建含sta56 ORF大片段的重组质粒TOPO-sta56。
2．以截短的sta56基因片... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
3-5 |
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英文摘要 |
5-7 |
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主要英文缩写词 |
7-8 |
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前言 |
8-10 |
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材料 |
10-13 |
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方法 |
13-32 |
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结果 |
32-55 |
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讨论 |
55-63 |
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总结 |
63-64 |
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参考文献 |
64-68 |
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综述 |
68-86 |
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致谢 |
86 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.178235 |
