| 【中文题名】 | 基于宏基因组的海绵及其共附生微生物功能基因（簇）研究 |
| 【英文题名】 | Metagenome-Based Functionalgene （Cluster）Study of Sponge and Its Associatied Bacterias |
| 【学科专业】 | 微生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-9-14 |
| 【中关键词】 | 海绵,海绵共附生微生物,基因组DNA,Fosmid宏基因组文库,聚酮合成酶,非核糖体肽合成酶 |
| 【英关键词】 | Sponge,Sponge associated microbes,Genomic DNA,Fosmid metagenome library,Polyketide Synthases（PKS）,Nonribosonml peptide synthetases（NRPS）, |
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| 【论文摘要】 |
1950年以来,人们从海绵中发现了大量活性物质,使海绵成为海洋活性物质最丰富的来源。越来越多研究表明一些活性物质是由海绵共附生微生物产生的,但是还缺乏直接的证据。我们前期研究已经筛选到多株具有抗菌活性的海绵共附生微生物,开展相关功能基因研究,从基因水平揭示这些抗菌活性的分子基础具有重要价值。同时,由于绝大多数海绵共附生微生物属于难培养微生物,因此建立宏基因组文库将为利用难培养的海绵共附生微生物功能基因资源意义正大。
尽管已有从海绵及其共附生微生物中分离得到具有抗肿瘤、抗菌等活性的聚酮化合物和非核糖体多肽的报道,但海绵及其共附生微生物中这两类化合物的合成基因(簇)研究非常少。本文目的在于利用宏基因组技术从海绵及其共附生微生物中筛选到聚酮合成酶(PKS)基因(簇)和非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因(簇),为所发现的抗菌活性提供分子基础,为海绵活性物质微生物来源假说提供证据,同时建立包含大片段DNA的海绵宏基因组文库为基因步从海绵中直接筛选相关功能基因簇提供基础。
实验室前期研究证明细薄星芒海绵(Stelletta tenui)共附生缓慢葡萄球菌A75具有广谱抗菌活性。本文提取缓慢葡萄球... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
5-7 |
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Abstract |
7-11 |
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第一章 前言 |
11-30 |
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1.1 海洋资源 |
11-12 |
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1.2 海绵概况 |
12-14 |
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1.3 海绵活性物质和功能基因 |
14-21 |
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1.4 大片段基因组文库 |
21-28 |
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1.5 研究目的、内容与意义 |
28-30 |
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第二章 实验材料和方法 |
30-55 |
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2.1 实验材料 |
30-38 |
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2.2 实验仪器 |
38-39 |
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2.3 实验方法 |
39-55 |
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第三章 细薄星芒海绵共附生缓慢葡萄球菌A75 FOSMID 基因组文库构建及PKS 基因簇筛选 |
55-79 |
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3.1 前言 |
55 |
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3.2 FOSMID 文库的构建 |
55-56 |
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3.3 A75 文库的筛选 |
56-57 |
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3.4 PKS 基因序列的获得 |
57-78 |
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3.5 结论 |
78-79 |
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第四章 皱皮软海绵共附生芽孢杆菌B114半流体FOSMID 基因组文库的构建及筛选 |
79-84 |
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4.1 前言 |
79 |
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4.2 半流体文库的构建 |
79-80 |
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4.3 半流体文库的筛选 |
80-81 |
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4.4 功能基因的确定 |
81-83 |
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4.5 结论 |
83-84 |
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第五章 基于海绵宏基因组DNA 的功能基因初步筛选和皱皮软海绵海绵宏基因组文库构建 |
84-92 |
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5.1 前言 |
84 |
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5.2 功能基因的初步筛选 |
84-88 |
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5.3 结果与讨论 |
88-90 |
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5.4 皱皮软海绵宏基因组文库的构建 |
90-91 |
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5.5 结论 |
91-92 |
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第六章 总结和讨论 |
92-94 |
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6.1 总结 |
92 |
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6.2 讨论 |
92-94 |
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附录1 A75 阳性克隆酶切测序结果 |
94-136 |
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附录2 皱皮软海绵PKS 基因和B114 阳性克隆NRPS 基因的DNA 序列 |
136-138 |
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参考文献 |
138-144 |
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论文发表情况 |
144-145 |
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致谢 |
145 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.34476 |
