| 【中文题名】 | 木豆酸性磷酸酯酶的纯化与动力学特性 |
| 【英文题名】 | Purification and Kinetic Characterization of Acid Phosphatase from Pigeon Pea |
| 【学科专业】 | 植物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-9-19 |
| 【中关键词】 | 木豆,酸性磷酸酯酶,纯化,动力学,特性, |
| 【英关键词】 | Acid Phosphatase,characterization,kintetic,pigeon pea,purification, |
| 【分类导航】 | 农业科学>农作物>豆类作物>其他>> |
| 【论文摘要】 |
以对硝基苯磷酸为底物，萌发的木豆种子粗提物经过硫酸铵分部沉淀、DEAE-Sephadex A25柱层析后得到两个有酸性磷酸酯酶活性的峰，分别收集这两个活性峰并经羟基磷灰石(HA)柱和伴刀豆球蛋白琼脂糖凝胶(Con-Sephorse 4B)柱层析进一步纯化得到两种酸性磷酸酯酶同工酶：纯化了51.3倍、比活力为10.8 U／mg蛋白的AcPaseⅠ；以及纯化了247倍、比活力为51.8 U／mg蛋白的AcPaseⅡ。非变性PAGE和变性SDS-PAGE检测AcPaseⅠ和AcPaseⅡ均呈现单一蛋白带，表明所获得的这两种同工酶都达到电泳纯，并且都是单亚基糖蛋白酶。SDS-PAGE法测定AcPaseⅠ分子量为32 kDa，AcPaseⅡ分子量为33 kDa。
AcPaseⅠ的最适pH为4.0，最适温度为50℃，pH在7.0以下，温度在50℃以下时酶活性稳定。以对硝基苯磷酸为底物测得AcPaseⅠ的米氏常数(Km)值为2.48 mmol／L，专一性常数(Vmax／Km)为1.47 U·mM~(-1)·mg~(-1)。AcPaseⅠ对PPi有较强的专一性，其米氏常数为0.15mmol／L，专一性常数为... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
4-6 |
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ABSTRACT |
6-11 |
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前言 |
11-20 |
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一 AcPase的分类 |
11-12 |
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二 AcPase的结构 |
12-13 |
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三 AcPsae的酶学特性 |
13-14 |
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四 AcPsae的亚细胞定位 |
14-15 |
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五 AcPase的作用 |
15-18 |
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六 木豆简介 |
18 |
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七 本文研究的目的与意义 |
18-20 |
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第一章 材料与方法 |
20-28 |
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1.1 供试材料 |
20 |
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1.2 主要供试试剂和主要仪器 |
20 |
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1.3 材料的处理 |
20 |
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1.4 AcPase的部分纯化 |
20-23 |
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1.4.1 粗分离 |
20-21 |
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1.4.2 盐溶 |
21 |
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1.4.3 盐析 |
21 |
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1.4.4 透析脱盐 |
21 |
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1.4.5 浓缩 |
21 |
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1.4.6 离子交换-凝胶过滤(DEAE-Sephadex A25)柱层析 |
21-22 |
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1.4.7 羟基磷灰石(HA)柱层析 |
22 |
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1.4.8 伴刀豆球蛋白琼脂糖(Con-Sepharose 4B)柱层析 |
22-23 |
|
1.4.9 酶活力的测定 |
23 |
|
1.4.10 蛋白质浓度测定 |
23 |
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1.4.11 纯度鉴定 |
23 |
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1.4.12 相对分子量测定 |
23 |
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1.5 AcPase的动力学特性 |
23-27 |
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1.5.1 pH值对酶活力的影响和pH稳定性测定 |
23-24 |
|
1.5.2 温度对酶活力的影响和热稳定性测定 |
24 |
|
1.5.3 AcPase底物专一性的测定 |
24-25 |
|
1.5.4 激活剂与抑制剂对AcPase的影响 |
25-27 |
|
1.6 代谢物对AcPase的影响 |
27-28 |
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第二章 结果与分析 |
28-54 |
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2.1 AcPase的纯化 |
28-32 |
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2.1.1 AcPase的提纯结果 |
28-31 |
|
2.1.2 AcPase的纯度鉴定 |
31-32 |
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2.2 AcPase的相对分子质量测定 |
32-33 |
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2.3 AcPase Ⅰ的动力学特性 |
33-49 |
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2.3.1 AcPase Ⅰ的最适pH和pH稳定性 |
33-34 |
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2.3.2 AcPase Ⅰ的最适温度和热稳定性 |
34 |
|
2.3.3 AcPase Ⅰ的底物专一性 |
34-38 |
|
2.3.4 激活剂与抑制剂对AcPase Ⅰ的作用结果 |
38-49 |
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2.4 AcPase Ⅱ的动力学特性 |
49-52 |
|
2.4.1 AcPase Ⅱ的最适pH和酸碱稳定性 |
49-50 |
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2.4.2 AcPase Ⅱ的最适温度和热稳定性 |
50-51 |
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2.4.3 AcPase Ⅱ的底物专一性 |
51 |
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2.4.4 激活剂与抑制剂对AcPase Ⅱ作用结果 |
51-52 |
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2.5 代谢物对AcPase的影响结果 |
52-54 |
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2.5.1 代谢物对AcPase Ⅰ的影响结果 |
52-53 |
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2.5.2 代谢物对AcPase Ⅱ的影响结果 |
53-54 |
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第三章 讨论 |
54-59 |
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3.1 AcPase的纯化 |
54-55 |
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3.2 AcPase Ⅰ的性质 |
55-57 |
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3.3 AcPase Ⅱ的性质 |
57-58 |
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3.4 代谢物对AcPase的影响 |
58-59 |
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第四章 结论 |
59-60 |
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参考文献 |
60-70 |
|
致谢 |
70-71 |
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攻读学位期间发表的学术论文 |
71 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.153342 |
