| 【论文摘要】 | 本研究应用快速扩增cDNA末端技术(rapid amplification cDNA ends,简称RACE,下同),克隆得到红小豆铁蛋白基因的cDNA序列;对RACE技术进行了探讨和改进。应用基因枪转化法将该铁蛋白基因的编码区(CDS)转入水稻中,为培育含铁量高的转基因水稻,提高水稻的营养品质,解决人类的铁缺乏症提供一条方便、经济、有效的途径。主要研究结果如下:
1、根据现有的大豆、豌豆等十几种植物铁蛋白基因的同源序列,设计简并引物,应用3’RACE扩增出红小豆铁蛋白基因cDNA的3’端序列,通过三次5’RACE扩增5’端序列,得到了红小豆铁蛋白基因cDNA,长度为1030bp,得到了完整的编码序列为768bp,共编码255个氨基酸。此序列在国内外尚未见报道,现已录入Genbank,登录号:AY663197。
2、通过反转录后回收较大分子量DNA后再用连接酶环化的策略,减轻了利用TaKaRa公司5’RACE试剂盒扩增基因5’端时,常常出现小片段之间重组问题的影响,提高了扩增成功的机率,为利用RACE克隆新基因提供了技术支持。
3、以RACE扩增得到的红小豆铁蛋白基因的CD... |
