| 【中文题名】 | 单细胞荧光原位杂交技术应用于植入前胚胎非整倍性筛查的研究 |
| 【英文题名】 | Single Cell FISH Analysis in Preimplantation Genetic Diagnosis for Aneuploidy Screening |
| 【学科专业】 | 妇产科学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2006-7-21 |
| 【中关键词】 | 非整倍体,冷冻保存,胚胎活检,荧光原位杂交,镶嵌现象, |
| 【英关键词】 | FISH,Aneuploidy,chromosomal mosaicism,embryo biopsy, |
| 【分类导航】 | 医药、卫生>基础医学>人体形态学>人体胚胎学（人体胎生学、发生学）>人体胚胎学研究方法>实验人体胚胎学 |
| 【论文摘要】 | 单细胞荧光原位杂交技术应用于植入前胚胎非整倍性筛查的研究
为验证早期胚胎活检卵裂球的染色体构成在胚胎发育过程中是否具有代表性,以及活检是否影响其后胚胎发育。本研究以解冻的冷冻胚胎为研究对象,从D3胚胎中活检两个卵裂球,然后把活检的胚胎继续培养到第5天,对活检的卵裂球和D5胚胎的卵裂球分别进行五色荧光探针的FISH分析(13、18、21、X和Y)。活检两个卵裂球D3胚胎的中,第5天得到确认分析的有15枚,其中10枚胚胎的诊断结果得到确认。早期胚胎卵裂球活检未见影响该活检胚胎的发育潜力,D3胚胎分析两个卵裂球得到的诊断结果的确认率从不同的角度解释是不一样的,原始诊断的确认率从临床角度高于从细胞遗传学角度。 |
| 【论文题纲】 |
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目录 |
5-7 |
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英文缩略词 |
7-8 |
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摘要 |
8-10 |
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Abstract |
10-12 |
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前言 |
12-14 |
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第1部分 冻融胚胎活检及囊胚培养 |
14-25 |
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1.1 胚胎来源 |
15-16 |
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1.2 实验方法 |
16-23 |
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1.2.1 控制性超排卵 |
16 |
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1.2.2 卵巢穿刺取卵 |
16-18 |
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1.2.3 体外受精和培养 |
18-19 |
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1.2.4 胚胎冷冻 |
19 |
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1.2.5 胚胎解冻 |
19-20 |
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1.2.6 D3胚胎的活检 |
20-21 |
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1.2.7 活检后胚胎的序贯培养 |
21-23 |
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1.3 胚胎活检过程 |
23-25 |
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第2部分 卵裂球的固定与 FISH |
25-33 |
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2.1 实验仪器与材料 |
26-29 |
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2.1.1 主要仪器、设备及耗材 |
26 |
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2.1.2 主要试剂及其配制 |
26-27 |
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2.1.3 FISH过程中各种冲洗液的配置 |
27-29 |
|
2.2 实验方法 |
29-33 |
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2.2.1 卵裂球的获取方法 |
29 |
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2.2.2 FISH血片的准备 |
29-30 |
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2.2.3 卵裂球的固定 |
30 |
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2.2.4 FISH步骤 |
30-31 |
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2.2.5 阅片和拍照 |
31 |
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2.2.6 实验内对照 |
31 |
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2.2.7 FISH信号的解释和定义 |
31-33 |
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第3部分 实验结果 |
33-40 |
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3.1 对照淋巴细胞杂交结果 |
34 |
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3.2 活检胚胎的囊胚形成率 |
34-35 |
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3.3 卵裂球固定结果 |
35 |
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3.4 两次 FISH分析结果 |
35-36 |
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3.5 D3胚胎两个卵裂球活检 FISH分析和 D5胚胎再分析对照结果 |
36-39 |
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3.6 D3胚胎一个卵裂球活检分析和 D5胚胎再分析对照结果 |
39-40 |
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第4部分 讨论 |
40-50 |
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4.1 D3胚胎活检对胚胎发育潜能的影响 |
41-42 |
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4.2 单细胞 FISH植入前遗传学诊断的主要技术要点 |
42-44 |
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4.2.1 固定前的低渗处理 |
42 |
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4.2.2 固定方法 |
42-43 |
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4.2.3 信号的记录 |
43-44 |
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4.3 体外早期胚胎染色体嵌合型的发生机理及影响因素 |
44-45 |
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4.3.1 胚胎嵌合型的发生机理 |
44 |
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4.3.2 胚胎发生嵌合型的影响因素 |
44-45 |
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4.3.3 胚胎嵌合型对IVF的影响 |
45 |
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4.4 单细胞 FISH在胚胎遗传学诊断中的必要性 |
45-46 |
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4.5 D3胚胎两个卵裂球 PISH分析在提高 PGD-AS诊断准确性上的作用 |
46-50 |
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4.5.1 D3胚胎活检的优势 |
46-47 |
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4.5.2 双卵裂球诊断确认率的影响因素 |
47-50 |
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总结 |
50-51 |
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参考文献 |
51-55 |
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综述:植入前遗传学诊断方法的现状和进展 |
55-68 |
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攻读硕士期间科研情况 |
68-69 |
|
致谢 |
69-70 |
|
附图 |
70-72 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.187134 |
