| 【论文摘要】 |
目的:对玻片表面不同修饰方法进行比较,选择制备蛋白质微阵列的表面修饰方法,并建立一种用蛋白质芯片检测血清中TORCH抗体的新方法。
方法:以玻片为基质,采用琼脂糖、多聚赖氨酸、氨基对玻片表面进行修饰,通过点样蛋白于修饰后的玻片制备蛋白质微阵列,比较不同修饰方法对蛋白质的固定效率;配制不同浓度的琼脂糖溶液,根据荧光强度确定最佳琼脂糖浓度;采用玻片表面修饰琼脂糖膜制备蛋白质抗原芯片,以荧光标记二抗,检测血清中TORCH IgM抗体。
结果:琼脂糖修饰的玻片具有三维表面结构,在固定的抗体浓度相同的情况下琼脂糖修饰玻片荧光强度是多聚赖氨酸修饰玻片的1.4倍,是氨基修饰玻片的4.6倍。当琼脂糖浓度为1.0%、蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高。琼脂糖修饰玻片作为载体制备的蛋白质芯片可检测到血清中微量TORCH抗体的存在,抗体之间交叉反应可忽略不计。用30例阳性血清和30例阴性血清检测,蛋白质芯片检测的灵敏度为93.3%,特异度为100%。
结论:琼脂糖修饰的玻片是一种理想的制备蛋白质微阵列的表面修饰方法。琼脂糖膜成为微阵列载体,这种载体不但制作简单,成本低廉,而且荧光背景低。同时凝... |