| 【中文题名】 | 用分割法建立不依赖选择标记的转基因技术 |
| 【英文题名】 | A New Genetic Transformation Technique Without Selection Marker Established by Dividing Treatment |
| 【学科专业】 | 生物化学与分子生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2004-9-16 |
| 【中关键词】 | 转基因技术,无标记,分割法,烟草,番茄, |
| 【英关键词】 | transgenic technology,marker-free,division technique,tobacco,tomato, |
| 【分类导航】 | 生物科学>分子生物学>基因工程(遗传工程）>>> |
| 【论文摘要】 | 21世纪是生命科学的世纪，谁占生物技术的优势地位，谁就会主导未来的生物经济时代。转基因技术是生物技术的重要内容之一，是改良品种的关键技术，在理论研究和实际应用中都具有极其重要的地位，但目前的转基因技术大都依赖于选择标记。本文利用分割法(即通过对转化处理的愈伤组织进行多次分割、培养和直接选择，富集转化细胞的方法)建立了不依赖选择标记的转基因技术，其目的在于解决伴随转基因作物越来越多而日益突出的选择标记问题，它可以消除由于应用选择标记可能在以下五个方面产生的不利影响，1)影响目标基因的表达，2)限制多个基因的转化，3)影响被改良植物的某些性状，4)危及环境安全，5)危害人身健康。近年来许多研究者利用共转化、位点特异性重组、转座子和同源重组等方法，开展了对转基因植物中的选择标记进行剔除的研究。但到目前为止还难以获得令人满意的结果。因此，建立不依赖选择标记的转基因技术比完成转基因后再剔除选择标记具有更重要的意义。
本文先以烟草(Nicotiana tabacum subsp．petit SR1)为受体，通过农杆菌介导转化，以GUS基因为追踪目标摸索了分割法的技术参数。当愈伤组织长至直径0.5cm时就进行均... |
| 【论文题纲】 |
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名词注释 |
6-7 |
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中文摘要 |
7-9 |
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英文摘要 |
9-11 |
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前言 |
11 |
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1 转基因产业的发展现状与前景 |
11-13 |
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2 转基因作物中选择标记的潜在危险 |
13-16 |
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2.1 选择标记可能会影响基因的表达 |
13-14 |
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2.2 选择标记会限制多个基因的转化 |
14 |
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2.3 选择标记可能会影响作物的某些性状 |
14 |
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2.4 选择标记可能会影响环境安全 |
14-15 |
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2.5 选择标记可能会危及人身安全 |
15-16 |
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3 剔除选择标记的研究进展与不足 |
16-21 |
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3.1 利用共转化系统 |
16-17 |
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3.2 利用位点特异性重组系统 |
17-19 |
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3.3 利用转座子系统 |
19-20 |
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3.4 利用同源重组作用 |
20 |
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3.5 利用其他方法 |
20-21 |
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4 用分割法建立不依赖选择标记的转基因技术 |
21-26 |
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4.1 现有的工作基础 |
21-24 |
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4.2 本研究的研究思路 |
24 |
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4.3 现有工作基础的不足与拟解决的问题 |
24-25 |
|
4.4 本研究的主要研究内容 |
25-26 |
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试验设计 |
26-63 |
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建立无选择标记转基因技术的试验设计 |
26-34 |
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1 小细胞团培养技术的改进试验 |
26-28 |
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2 农杆菌介导转化技术的改进试验 |
28-30 |
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3 分割法技术参数的摸索试验 |
30-34 |
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验证无选择标记转基因技术的试验设计 |
34-40 |
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1 改变供体基因验证试验 |
34-37 |
|
2 改变受体验证试验 |
37-40 |
|
建立无选择标记转基因技术的结果分析 |
40-58 |
|
1 改进小细胞团培养技术的试验结果 |
40-45 |
|
1.1 激素对小细胞团生长的影响 |
40-41 |
|
1.2 培养基对小细胞团生长的影响 |
41-42 |
|
1.3 氮源类型对小细胞团生长的影响 |
42-43 |
|
1.4 有机成分对小细胞团生长的影响 |
43 |
|
1.5 AgNO3对分割结果的影响 |
43-44 |
|
1.6 不同抗菌素对小细胞团成活率的影响 |
44 |
|
1.7 结论 |
44-45 |
|
2 优化农杆菌介导转化技术的试验结果 |
45-48 |
|
2.1 大肠杆菌及农杆菌的转化结果 |
45 |
|
2.2 侵染与共培养时基础条件的优化 |
45-46 |
|
2.3 农杆菌浓度和侵染时间对转化的影响 |
46 |
|
2.4 共培养时间对转化的影响 |
46-47 |
|
2.5 乙酰丁香酮对转化的影响 |
47 |
|
2.6 肌醇浓度对转化的影响 |
47-48 |
|
2.7 结论 |
48 |
|
3 摸索分割法技术参数的试验结果 |
48-56 |
|
3.1 六十四分的结果 |
49-51 |
|
3.2 三十二分的结果 |
51-52 |
|
3.3 十六分的结果 |
52-53 |
|
3.4 八分的结果 |
53-55 |
|
3.5 各种分割处理获得转化植株的效率分析 |
55-56 |
|
3.6 结论 |
56 |
|
4 小结 |
56-58 |
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验证无选择标记转基因技术的结果分析 |
58-63 |
|
1 改变供体基因的试验结果 |
58-59 |
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1.1 对愈伤检组织的测结果 |
58 |
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1.2 对转化株检测结果 |
58-59 |
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1.3 转化株的PCR检测与分子杂交分析 |
59 |
|
1.4 结论 |
59 |
|
2 改变受体的试验结果 |
59-63 |
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2.1 培养基及激素配比对番茄小细胞团培养的影响 |
60 |
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2.2 分割处理的结果 |
60-61 |
|
2.3 转化植株的分子杂交分析 |
61-62 |
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2.4 结论 |
62-63 |
|
总结与讨论 |
63-67 |
|
1 结论 |
63-64 |
|
2 讨论 |
64-67 |
|
参考文献 |
67-72 |
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附1 试验中涉及的培养基和溶液配方 |
72-77 |
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致谢 |
77-78 |
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作者简介 |
78 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.28124 |
