| 【中文题名】 | 草鱼β_2m基因的分子克隆与MHC class Ⅰ多态性分析及其重组蛋白的鉴定 |
| 【英文题名】 | β_2m cDNA Cloning, MHC Class Ⅰ Diversity and Its Recombinant Protein Identification of the Grass Carp |
| 【学科专业】 | 预防兽医学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2005-7-22 |
| 【中关键词】 | 草鱼,β_2-微球蛋白,MHC,class,I,克隆 |
| 【英关键词】 | grass carp,β_2-microglobulin,MHC class I,clone,expression, |
| 【分类导航】 | 生物科学>分子生物学>基因工程(遗传工程）>转化及克隆>> |
| 【论文摘要】 | 为了阐明草鱼MHC Ⅰ(Ctid-MHC Ⅰ)和β_2m(Ctid-β_2m)分子特征,推进低等脊椎动物MHC结合抗原多肽的相关研究,本研究在克隆Ctid-β_2m分子基础上,分析了Ctid-MHC Ⅰ多样性;并对Ctid-MHC Ⅰ在各组织的表达进行了定量。最后,表达、鉴定了Ctid-MHC Ⅰ重组蛋白。
首先构建了草鱼cDNA文库。根据动物MHC Ⅰ轻链基因(β_2m)序列设计了兼并引物,从文库中克隆了Ctid-β_2m 5′-端cDNA,再用Anchored-PCR克隆了Ctid-β_2m全基因。同时,采用RT-PCR从15尾草鱼分离了其Ctid-MHC Ⅰ基因;并采用pMALTM-p2X原核系统可溶性表达了Ctid-MHCⅠ。随后,在分析个体Ctid-MHC Ⅰ cDNA多样性的基础上,采用QC-RT-PCR法对各组织Ctid-MHCⅠ的表达状况进行了定量。
结果表明,Ctid-β_2m由116个氨基酸编码,含19个氨基酸的信号肽和97个氨基酸的成熟肽;与其它硬骨鱼类在氨基酸水平的同源率为58.6%-75.0%。根据Ctid-β_2m序列结构可将其聚类成两类(β_2m-NA,β... |
| 【论文题纲】 |
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引言 |
8-18 |
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1．MHC的结构 |
8-10 |
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2．MHC的功能 |
10-13 |
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3．鱼类MHC的研究进展 |
13-16 |
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4．β_2m的研究进展 |
16-17 |
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5．研究目的和意义 |
17-18 |
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第一章 Ctid-β_2m cDNA的分子克隆 |
18-34 |
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1．材料 |
18-21 |
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2．方法 |
21-28 |
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3．结果 |
28-33 |
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4．讨论 |
33-34 |
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第二章 Ctid-MHC Ⅰ基因的多态性分析 |
34-50 |
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1．材料与方法 |
34-36 |
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2．结果 |
36-49 |
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3．讨论 |
49-50 |
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第三章 QC-RT-PCR定量分析Ctid-MHC Ⅰ在组织中的特异表达 |
50-57 |
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1．材料与方法 |
50-52 |
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2．结果 |
52-55 |
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3．讨论 |
55-57 |
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第四章 Ctid-MHC Ⅰ重组蛋白表达与鉴定 |
57-69 |
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1．材料 |
57-59 |
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2．方法 |
59-63 |
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3．结果 |
63-68 |
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4．讨论 |
68-69 |
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结论 |
69-70 |
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参考文献 |
70-76 |
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致谢 |
76-77 |
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作者简历 |
77 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.28369 |
