| 【论文摘要】 |
人血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是体内调节血小板生成的首要调节因子,它可以特异性提高体内血小板的水平,预防和治疗由于放化疗引起的血小板减少症及原发性血小板减少性紫癜。最新研究还发现,TPO作为一种细胞调节因子可以促进造血干细胞的增长。本研究的最终目的和意义是:为了制备乳汁中高效表达人血小板生成素的转基因克隆牛,构建不同启动子引导的TPO真核表达载体,使其在乳腺特异表达,并分别在细胞水平和个体水平检测TPO表达量,同时为TPO及启动子等基因表达调控提供科学数据。研究和实验方法:构建三个乳腺特异表达载体pB3.9T、pB1.9T和pPT,通过瞬间转染及稳定整合后,在转录及翻译水平检测TPO表达。
结果显示,首先,本实验选用的长约1.3kb的TPO minigene经转录后可以正确地剪切,并翻译合成人TPO。其次,BLG3.9、BLG1.9和P1A3三种调控元件都可以启动人TPO在乳腺细胞中特异表达。第三,pB3.9T表达量要明显高于pB1.9T。第四,当表达载体稳定整合入细胞基因组,TPO表达量呈稳步上升趋势,并且要高于瞬时转染的表达量。第五,在瞬时转染及稳定转染早期,P1... |