| 【中文题名】 | 基因枪轰击法获得转P5CS基因黑麦草植株 |
| 【英文题名】 | Co-transformation of Bar and P5CS Gene Using Bombardment on Perennial Ryegrass (Lolium Perenne L.) |
| 【学科专业】 | 作物遗传育种 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2004-7-8 |
| 【中关键词】 | 多年生黑麦草,成熟胚,幼穗,植株再生,bar基因,P5CS基因 |
| 【英关键词】 | Perennial ryegrass,Mature embryo,Immature inflorescence,Plant regeneration,Bar gene,P5CS gene, |
| 【分类导航】 | 农业科学>园艺>观赏园艺（花卉和观赏树木）>园林植物栽培及应用技术>草坪与地被植物> |
| 【论文摘要】 | 多年生黑麦草是优质的草坪草，利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。我们在建立了高效的多年生黑麦草组培再生体系的基础上，通过基因枪法转化P5CS基因，获得了多年生黑麦草的新品系，为培育抗旱、耐盐草坪型黑麦草提供了新种质。主要结果如下：
1．建立了多年生黑麦草两种外植体的再生体系
经过对比试验，筛选出适合于黑麦草成熟胚为外植体的再生培养基配方，愈伤诱导培养基MS + 2,4-D 5mg/L + mannitol 0.2mol/L为最佳，分化培养基为1/2MS培养基（大量减半）+ 2,4-D 1mg/L + KT 1mg/L，分化率为71%。并对影响其再生频率因素作了初步分析。种子浸泡时间越短，胚乳越少越有利于愈伤组织的诱导。幼穗愈伤诱导和分化培养基均为MS＋2,4-D 3mg/L +6-BA 0.5mg/L + sucrose 3%，成功地建立了再生体系，愈伤诱导和分化率分别为80%和81%。取材时间对愈伤诱导影响不大，拓展了转化外植体的取材范围。
2．初步建立了多年生黑麦草的遗传转化体系
(1) 对愈伤组织进行除草剂Glufosinate的敏感性试验，确定了两轮筛选阶
段的... |
| 【论文题纲】 |
|
第一章 引言 |
9-23 |
|
1 草坪草育种的发展概况 |
9-18 |
|
1.1 我国草坪草育种发展概况 |
9-11 |
|
1.2 草坪草的组织再生体系 |
11-15 |
|
1.2.1 植株再生体系的建立 |
11-15 |
|
1.3 转化体系 |
15-18 |
|
1.3.1 硅碳纤维介导的直接基因转化 |
15 |
|
1.3.2 电击融合法和PEG介导的DNA直接转移导入原生质体 |
15-16 |
|
1.3.3 基因枪法介导的直接基因转化 |
16 |
|
1.3.4 农杆菌介导的转化法 |
16-18 |
|
2 选择标记基因与启动子 |
18 |
|
3 抗非生物胁迫 |
18-20 |
|
4 存在问题与展望 |
20-21 |
|
5 本研究的目的和意义 |
21-23 |
|
第二章 黑麦草组培再生体系 |
23-30 |
|
1 黑麦草成熟胚为外植体的组培体系 |
23-27 |
|
1.1 材料与方法 |
23 |
|
1.1.1 植物材料 |
23 |
|
1.1.2 外植体消毒及愈伤组织诱导 |
23 |
|
1.1.3 愈伤组织的分化及植株再生 |
23 |
|
1.2 结果与分析 |
23-26 |
|
1.2.1 愈伤诱导率与浸种时间和不同培养基的关系 |
23-25 |
|
1.2.2 不同激素比对胚性愈伤组织分化的影响 |
25 |
|
1.2.3 再生植株的生根和移栽 |
25-26 |
|
1.3 讨论 |
26-27 |
|
1.3.1 种子浸泡时间与对愈伤形成的影响 |
26 |
|
1.3.2 胚乳对诱导愈伤的影响 |
26 |
|
1.3.3 体细胞胚的发生 |
26-27 |
|
1.3.4 激素对分化影响 |
27 |
|
2 黑麦草幼穗为外植体的组织培养体系 |
27-30 |
|
2.1 材料与方法 |
27 |
|
2.1.1 植株材料 |
27 |
|
2.1.2 外植体的消毒及愈伤组织诱导 |
27 |
|
2.1.3 愈伤组织的分化及植株再生 |
27 |
|
2.2 结果与分析 |
27-28 |
|
2.2.1 愈伤质量、诱导率、分化率及植株再生 |
27-28 |
|
2.3 讨论 |
28-30 |
|
2.3.1 取材时间与愈伤发生部位 |
28 |
|
2.3.2 同属不同种在相同或相似培养基的表现 |
28 |
|
2.3.3 器官发生途径 |
28 |
|
2.3.4 白化苗与2,4-D浓度的关系 |
28-29 |
|
2.3.5 激素对愈伤继代和分化能力保持的影响 |
29-30 |
|
第三章 基因枪轰击法获得转P5CS基因的黑麦草植株 |
30-46 |
|
1 材料 |
30-31 |
|
1.1 受体材料 |
30 |
|
1.2 转化所用的重组质粒 |
30 |
|
1.3 试剂 |
30 |
|
1.4 培养基的名称及配方 |
30-31 |
|
1.4.1 成熟胚的培养基名称及配方 |
30-31 |
|
1.4.2 幼穗的培养基名称及配方 |
31 |
|
1.5 仪器设备 |
31 |
|
2 实验方法 |
31-40 |
|
2.1 黑麦草愈伤组织对选择剂Glufosinate的抗性的测定 |
31 |
|
2.2 黑麦草基因枪法转化 |
31-35 |
|
2.2.1 受体准备 |
31 |
|
2.2.2 貭粒的提取和纯化 |
31-33 |
|
2.2.3 基因枪法共转化 |
33-35 |
|
2.3 转化体筛选和植株再生 |
35 |
|
2.3.1 成熟胚为外植体的转化体筛选和植株再生 |
35 |
|
2.3.2 幼穗为外植体的转化体筛选和植株再生 |
35 |
|
2.4 PCR及PCR-Southern检测 |
35-40 |
|
2.4.1 PCR检测 |
35-37 |
|
2.4.2 PCR-Southern杂交检测 |
37-40 |
|
3 结果与分析 |
40-44 |
|
3.1 愈伤组织对除草剂的敏感性测定 |
40 |
|
3.2 基因枪转化后的抗性筛选及抗性愈伤组织分化苗 |
40-42 |
|
3.2.1 以成熟胚为外植体的抗性筛选及抗性愈伤组织分化苗 |
40-42 |
|
3.2.2 以幼穗为外植体的抗性筛选及抗性愈伤组织分化苗 |
42 |
|
3.3 转基因植株的PCR和PCR-Southern检测 |
42-44 |
|
3.3.1 以成熟胚为外植体的转基因植株的PCR和PCR-Southern检测 |
42-43 |
|
3.3.2 以幼穗为外植体的转基因植株的PCR检测 |
43-44 |
|
4 讨论 |
44-46 |
|
4.1 提高遗传转化的途径 |
44-45 |
|
4.2 共转化 |
45-46 |
|
第四章 结论 |
46-47 |
|
1 建立了多年生黑麦草两种外植体的再生体系 |
46 |
|
2 初步建立了多年黑麦草的遗传转化体系 |
46-47 |
|
致谢 |
47-48 |
|
参考文献 |
48-56 |
|
作者简介 |
56 |
|
| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.159957 |
