| 【中文题名】 | 黑麦草、剪股颖再生体系的建立及农杆菌介导cry8C基因的导入 |
| 【英文题名】 | Establishment of Regeneration System of Perennial Ryegrass、Creeping Bentgrass and Agrobacterium Tumefaciens-mediated Transformation with cry8C |
| 【学科专业】 | 微生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2006-9-13 |
| 【中关键词】 | 多年生黑麦草,匍匐剪股颖,再生体系,cry8C,农杆菌,遗传转化 |
| 【英关键词】 | Perennial ryegrass （Lolium perenne L.）,creeping bentgrass （Agrostis stolonifera L.）,Plant regeneration,cry8C,Agrobacterium tumefaciens,Genetic transformation, |
| 【分类导航】 | 农业科学>园艺>观赏园艺（花卉和观赏树木）>园林植物栽培及应用技术>草坪与地被植物> |
| 【论文摘要】 | 多年生黑麦草(Lolium perenne L．)、匍匐剪股颖(Agrostis stolonifera L．)是国内外广泛应用的重要冷季型草坪草之一，利用植物基因工程技术改良其抗虫性对防治地下害虫的危害，减少杀虫剂的使用，保护环境，节约草坪维护费用具有重要的意义。本文对这两种草坪草的组织培养与植株再生技术进行了研究。对于农杆菌介导的遗传转化技术进行了探索。经PCR方法检测，已获得转cry8C基因剪股颖。其主要研究内容如下：
(1) 以多年生黑麦草卡特、畅想种子为外植体，卡特在2，4-D浓度为9mg/L时，愈伤诱导率最高达到41.3％；畅想在2，4-D浓度为7mg/L时，愈伤诱导率最高达到33.3％；在7mg／L 2，4-D时卡特胚性愈伤诱导率最高达到24.7％，畅想胚性愈伤诱导率最高达到18.7％。添加细胞分裂素TDZ对提高愈伤组织的诱导率有一定的作用，有助于改善愈伤组织状态。以黑麦草胚轴为外植体，其愈伤诱导率低于成熟种子的诱导率。添加脯氨酸和水解酪蛋白可以提高胚性愈伤诱导率。剪股颖南岸种子在6mg／L 2，4-D和0.2 mg/L TDZ培养基中诱导率最高达到68.1％，在5mg／L 2，... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
6-7 |
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Abstract |
7-9 |
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第一章 绪论 |
9-22 |
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1.0 引言 |
9 |
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1.1 草坪地下害虫蛴螬的危害及防治 |
9-10 |
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1.1.1 蛴螬的危害 |
9-10 |
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1.1.2 蛴螬的防治 |
10 |
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1.2 苏云金芽孢杆菌cry8类基因的研究 |
10-12 |
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1.2.1 Bt杀虫晶体蛋白及其分类 |
11 |
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1.2.2 cry8类基因的研究 |
11-12 |
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1.3 转Bt基因植物的研究进展 |
12-14 |
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1.3.1 转Bt基因植物概述 |
12-13 |
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1.3.2 提高外源抗虫基因在植物体内的表达 |
13 |
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1.3.3 防治害虫产生抗性的策略 |
13-14 |
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1.3.4 生物安全性 |
14 |
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1.4 黑麦草、剪股颖转基因育种的研究进展 |
14-21 |
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1.4.1 黑麦草、剪股颖组织培养和再生体系的建立 |
15-17 |
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1.4.2 黑麦草、剪股颖遗传转化体系的建立 |
17-20 |
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1.4.3 转基因植物外源基因的表达和鉴定 |
20-21 |
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1.5 本论文研究的目的与意义 |
21-22 |
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第二章 黑麦草、剪股颖愈伤组织诱导与植株再生 |
22-35 |
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2.1 材料与方法 |
22-24 |
|
2.1.1 材料 |
22 |
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2.1.2 方法 |
22-24 |
|
2.2 结果与分析 |
24-33 |
|
2.2.1 不同因素对愈伤组织诱导的影响 |
24-30 |
|
2.2.2 不同激素浓度对愈伤组织分化的影响 |
30-31 |
|
2.2.3 不同继代时间对愈伤分化能力的影响 |
31-32 |
|
2.2.4 再生植株的生根及移栽 |
32-33 |
|
2.3 讨论 |
33-35 |
|
2.3.1 各种因素对愈伤组织诱导的影响 |
33-34 |
|
2.3.2 植物激素对愈伤组织分化的影响 |
34 |
|
2.3.3 继代时间对愈伤组织分化能力的影响 |
34-35 |
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第三章 Cry8C表达载体的构建 |
35-43 |
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3.1 材料和方法 |
35-39 |
|
3.1.1 质粒和菌株 |
35 |
|
3.1.2 酶和试剂 |
35 |
|
3.1.3 培养基 |
35-36 |
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3.1.4 仪器设备 |
36 |
|
3.1.5 基本实验方法 |
36-39 |
|
3.2 结果与分析 |
39-42 |
|
3.2.1 p30U8C载体的构建 |
39-41 |
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3.2.2 p30T8C载体的构建 |
41-42 |
|
3.3 讨论 |
42-43 |
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第四章 黑麦草、剪股颖愈伤组织的农杆菌转化与鉴定 |
43-56 |
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4.1 材料和方法 |
43-47 |
|
4.1.1 材料 |
43-44 |
|
4.1.2 方法 |
44-47 |
|
4.2 结果与分析 |
47-54 |
|
4.2.1 农杆菌转化子鉴定 |
47-48 |
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4.2.2 愈伤组织筛选压的确定 |
48-50 |
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4.2.3 黑麦草、剪股颖农杆菌转化因素的影响 |
50-53 |
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4.2.4 黑麦草、剪股颖再生植株的筛选 |
53-54 |
|
4.2.5 转基因植株 PCR鉴定 |
54 |
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4.3 讨论 |
54-56 |
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4.3.1 PPT筛选在农杆菌转化中的作用 |
54-55 |
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4.3.2 农杆菌介导黑麦草、剪股颖胚性愈伤组织转化的主要影响因素 |
55-56 |
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结论 |
56-57 |
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参考文献 |
57-63 |
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主要缩略词表 |
63-65 |
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附图 |
65-67 |
|
致谢 |
67-68 |
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读研期间已发表文章 |
68 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.160248 |
