| 【中文题名】 | 蝴蝶兰、文心兰再生体系的建立及遗传转化体系的初步研究 |
| 【英文题名】 | Preliminary Studies on Regeneration and Transformations Systems of Phalaenopsis and Oncidium |
| 【学科专业】 | 作物栽培学与耕作学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-9-14 |
| 【中关键词】 | 蝴蝶兰,文心兰,组织培养,农杆菌介导,遗传转化, |
| 【英关键词】 | Phalaenopsis,Oncidium,Tissue culture,Agrobacterium tumefaciens mediated method,Transformation, |
| 【分类导航】 | 农业科学>园艺>观赏园艺（花卉和观赏树木）>多年生花卉类>其他花卉类>兰科植物 |
| 【论文摘要】 |
本试验主要以蝴蝶兰、文心兰作为材料，建立了蝴蝶兰、文心兰的高频再生体系，并在此基础上进行了农杆菌介导的GUS基因的转化，利用共培养后组织化学染色法分析探讨了影响转化效率的各种因素，初步优化了遗传转化体系。主要结果如下：
1．蝴蝶兰幼嫩花梗原球茎状体诱导率较高，培养基MS+6-BA 5.0mg／L+NAA 0.5 mg／L诱导率最高，达100％；原球茎增殖的最佳培养基MS+6-BA 3.0 mg／L+NAA 0.2 mg／L+TDZ 0.2 mg／L，增殖系数达2.3；原球茎块在培养瓶内有群体优势效应，切块3.0 mm时增殖系数最大；添加6-BA和NAA的1／2 MS有利于生根，平均根数达到3.2条；室内炼苗3 d+室外炼苗3 d有利于移栽，移栽成活率达90.0％。
2．以文心兰花梗为材料，在NAA 1.0 mg／L+6-BA 0.2 mg／L+TDZ 0.3mg／L的培养基上，愈伤组织诱导率最高，可达78％，诱导率受[NAA]／[6-BA]的浓度比和光照强度的影响；在6-BA 0.4 mg／L+NAA 0.2 mg／L的激素组合下，从愈伤组织分化出幼苗的形成率和商品化率可达到最佳效果... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
4-6 |
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ABSTRACT |
6-11 |
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前言 |
11-23 |
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一 兰花组织培养的研究进展 |
12-19 |
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(一) 兰花组织培养的概述 |
12-13 |
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(二) 兰花组织培养的程序 |
13 |
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(三) 兰花不同外植体的培养 |
13-14 |
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(四) 兰花组织培养的培养基与激素 |
14 |
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(五) 兰花幼苗生长 |
14-15 |
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(六) 兰花试管苗移栽 |
15 |
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(七) 兰花施肥技术研究 |
15-16 |
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(八) 蝴蝶兰组织培养的研究进展 |
16-18 |
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(九) 文心兰组织培养研究进展 |
18-19 |
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二 兰花转基因技术的研究进展 |
19-23 |
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(一) 基因枪法 |
21 |
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(二) 农杆菌介导法 |
21-22 |
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(三) 其它转化方法 |
22-23 |
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第一章 材料与方法 |
23-36 |
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1.1 蝴蝶兰再生体系的建立 |
23-25 |
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1.1.1 材料 |
23-24 |
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1.1.1.1 品种 |
23 |
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1.1.1.2 兰花组织培养的培养基 |
23-24 |
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1.1.2 方法 |
24-25 |
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1.1.2.1 蝴蝶兰花梗茎段芽诱导 |
24 |
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1.1.2.2 蝴蝶兰原球茎的诱导 |
24 |
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1.1.2.3 蝴蝶兰原球茎的增殖 |
24 |
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1.1.2.4 蝴蝶兰出苗和生根培养 |
24-25 |
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1.1.2.5 蝴蝶兰的移栽 |
25 |
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1.2 文心兰再生体系的建立 |
25-26 |
|
1.2.1 材料 |
25 |
|
1.2.2 方法 |
25-26 |
|
1.2.2.1 文心兰愈伤组织的诱导 |
25 |
|
1.2.2.2 文心兰愈伤组织的分化 |
25 |
|
1.2.2.3 文心兰壮苗、生根和移栽 |
25-26 |
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1.2.2.4 计算方法 |
26 |
|
1.3 蝴蝶兰、文心兰对抗生素的敏感性反应 |
26-27 |
|
1.3.1 材料 |
26 |
|
1.3.2 方法 |
26-27 |
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1.3.2.1 培养基 |
26 |
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1.3.2.2 接种 |
26-27 |
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1.4 蝴蝶兰、文心兰遗传转化体系的初步研究 |
27-36 |
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1.4.1 材料 |
27-30 |
|
1.4.1.1 植物受体材料 |
27 |
|
1.4.1.2 菌株与质粒 |
27-28 |
|
1.4.1.3 培养基 |
28 |
|
1.4.1.4 培养条件及菌种保存 |
28-29 |
|
1.4.1.5 溶液的配制 |
29-30 |
|
1.4.1.6 主要仪器设备 |
30 |
|
1.4.2 方法 |
30-36 |
|
1.4.2.1 碱法小量提取质粒 DNA |
30-31 |
|
1.4.2.2 JM109感受态细胞的制备 |
31 |
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1.4.2.3 DNA转化感受态 |
31-32 |
|
1.4.2.4 根癌农杆菌感受态细胞的制备 |
32 |
|
1.4.2.5 液氮冻融法转化农杆菌 |
32 |
|
1.4.2.6 农杆菌Ti质粒DNA提取 |
32-33 |
|
1.4.2.7 PCR反应 |
33-34 |
|
1.4.2.8 凝胶电泳 |
34 |
|
1.4.2.9 共培养转化 |
34-36 |
|
第二章 结果与分析 |
36-51 |
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2.1 蝴蝶兰再生体系的建立 |
36-40 |
|
2.1.1 蝴蝶兰花梗茎段芽诱导技术的研究 |
36-37 |
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2.1.1.1 不同灭菌时间对外植体灭菌效果的影响 |
36 |
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2.1.1.2 不同花梗部位对节芽诱导效果的影响 |
36-37 |
|
2.1.2 蝴蝶兰原球茎诱导技的研究 |
37-40 |
|
2.1.2.1 不同激素组合对原球茎体的诱导影响 |
37-38 |
|
2.1.2.2 大量元素对原球茎诱导的影响 |
38 |
|
2.1.2.3 不同激素组合对原球茎增殖的影响 |
38-39 |
|
2.1.2.4 不同原球茎切块大小对增殖的影响 |
39 |
|
2.1.2.5 不同激素组合对蝴蝶兰苗生根的影响 |
39-40 |
|
2.1.2.6 炼苗处理对蝴蝶兰组培苗移栽成活率的影响 |
40 |
|
2.2 文心兰再生体系的建立 |
40-44 |
|
2.2.1 植物激素对文心兰诱导愈伤组织的影响 |
40-41 |
|
2.2.2 光照条件对文心兰诱导愈伤组织的影响 |
41-42 |
|
2.2.3 植物激素对文心兰愈伤组织分化的影响 |
42-43 |
|
2.2.4 基本培养基对文心兰愈伤组织分化的影响 |
43 |
|
2.2.5 文心兰壮苗生根和出瓶移栽 |
43-44 |
|
2.3 蝴蝶兰、文心兰对抗生素的敏感性反应 |
44-46 |
|
2.3.1 卡那霉素对蝴蝶兰、文心兰生长的影响 |
44-45 |
|
2.3.2 Cef(头孢霉素)对蝴蝶兰、文心兰生长的影响 |
45-46 |
|
2.4 蝴蝶兰、文心兰遗传转化体系的初步研究 |
46-51 |
|
2.4.1 不同预培养时间对转化率的影响 |
46 |
|
2.4.2 三种菌株侵染性比较 |
46-47 |
|
2.4.3 菌液浓度对转化率的影响 |
47-48 |
|
2.4.4 不同的侵染时间对农杆菌转化的影响 |
48 |
|
2.4.5 不同的转化方法对GUS瞬时表达的影响 |
48-49 |
|
2.4.6 不同浓度的AS侵染效果的比较 |
49 |
|
2.4.7 共培养时间对转化的影响 |
49-51 |
|
第三章 讨论与小结 |
51-56 |
|
3.1 讨论 |
51-55 |
|
3.1.1 蝴蝶兰再生体系的建立 |
51 |
|
3.1.2 文心兰再生体系的建立 |
51-52 |
|
3.1.3 蝴蝶兰、文心兰对抗生素的敏感性反应 |
52 |
|
3.1.4 蝴蝶兰、文心兰遗传转化体系的初步研究 |
52-55 |
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3.1.4.1 预培养对遗传转化的影响 |
52 |
|
3.1.4.2 菌液浓度和侵染时间对遗传转化的影响 |
52-53 |
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3.1.4.3 普通农杆菌转化方法的优化 |
53 |
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3.1.4.4 共培养与转化率的关系 |
53-55 |
|
3.3 本研究的创新性 |
55 |
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3.4 研究中存在的问题及展望 |
55-56 |
|
参考文献 |
56-63 |
|
附图 |
63-65 |
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缩略词 |
65-66 |
|
致谢 |
66-67 |
|
在读期间发表所发表论文 |
67 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.160546 |
