| 【中文题名】 | 桃ACC合成酶基因的分离及桃、番茄离体转化体系的建立 |
| 【英文题名】 | |
| 【学科专业】 | 植物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2005-11-14 |
| 【中关键词】 | 桃,ACC合成酶,成熟相关,乙烯生物合成,DNA提取,基因克隆 |
| 【英关键词】 | Peach,ACC synthase,Ripening-related,ethelyne biosynthesis,DNA extraction,Gene clone,Toamto,Cotyledon,Callus,Differentiation,Hyg,Genetic transformation system, |
| 【分类导航】 | 农业科学>园艺>果树园艺>核果类>桃> |
| 【论文摘要】 | 桃汁多味美,深受人们喜爱。然而,桃果独特的成熟衰老特性使其贮藏保鲜难度很大。果实的成熟与乙烯的生物合成密切相关,在乙烯生物合成过程中,ACC合成酶和ACC氧化酶是两个关键酶。本研究以水蜜桃新品种“新白花”等为试材,开展了与成熟相关ACC合成酶基因的分离及桃、番茄离体培养遗传转化体系的建立等方面的工作,为运用基因工程技术延长桃果实贮藏期奠定了重要基础。
改进了桃基因组DNA的提取方法:将裂解缓冲液中CTAB提高到3%,加入3%PVP,并延长水浴时间至1.5h。采用该改进方法得到的DNA溶液多糖含量少且无褐化现象,适于后续的分子生物学操作。
以上述提取的桃基因组DNA为模板,根据桃品种“Hakuho”成熟相关的ACC合成酶基因cDNA序列,设计了两对特异引物P_1、P_2及P_3、P_4,利用PCR方法扩增得到了两个特异片段,经过拼接获得了桃基因组ACC合成酶基因的完整序列(GenBank Accession:AY994054),并对其进行了生物信息学分析。该序列全长2496 bp,包括4个外显子和3个内含子,4个外显子共长1479 bp。桃ACC合成酶基因编码区与蔷薇科梅(Prunu... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
6-8 |
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英文摘要 |
8-10 |
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前言 |
10-12 |
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第一部分 文献综述 |
12-33 |
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第一章 植物延熟保鲜基因工程研究进展 |
12-25 |
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1 乙烯合成相关基因工程研究进展 |
12-19 |
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1．1 ACC合成酶(ACC synthase) |
12-15 |
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1．2 ACC氧化酶(ACC oxidase) |
15-18 |
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1．3 ACC脱氨酶(ACC deaminase) |
18-19 |
|
2 乙烯受体基因工程研究进展 |
19 |
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3 果实软化相关基因工程研究进展 |
19-20 |
|
3．1 PE(pectinesterase) |
19-20 |
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3．2 PG(polygalacturonase) |
20 |
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3．3 Expansin |
20 |
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4 讨论 |
20-21 |
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参考文献 |
21-25 |
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第二章 桃离体转化研究进展 |
25-29 |
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1 外植体类型 |
25 |
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2 愈伤组织的诱导与不定芽的分化 |
25-26 |
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3 生根培养 |
26-27 |
|
4 遗传转化 |
27 |
|
参考文献 |
27-29 |
|
第三章 番茄离体转化研究进展 |
29-33 |
|
1 离体培养 |
29-30 |
|
2 遗传转化 |
30-31 |
|
参考文献 |
31-33 |
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第二部分 研究报告 |
33-70 |
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第一章 桃ACC合成酶基因的分离及其生物信息学分析 |
33-49 |
|
1 材料与方法 |
33-39 |
|
1．1 植物材料 |
33 |
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1．2 质粒和菌种 |
33 |
|
1．3 工具酶与化学试剂 |
33-34 |
|
1．4 质粒DNA的提取 |
34-35 |
|
1．5 植物基因组DNA的提取 |
35-36 |
|
1．6 引物设计与PCR扩增 |
36-37 |
|
1．7 PCR产物的T-A克隆 |
37 |
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1．8 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化(氯化钙法) |
37-38 |
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1．9 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化(氯化镁法) |
38-39 |
|
1．10 重组菌落的鉴定 |
39 |
|
1．11 序列测定 |
39 |
|
2 结果与分析 |
39-47 |
|
2．1 桃叶片基因组DNA的提取 |
39-40 |
|
2．2 ACC合成酶基因片段的扩增 |
40 |
|
2．3 PCR产物的T-A克隆及酶切鉴定 |
40-41 |
|
2．4 序列测定、全序列的拼接及其氨基酸序列的推导 |
41-43 |
|
2．5 桃基因组ACC合成酶基因全序列的生物信息学分析 |
43-47 |
|
3 讨论 |
47 |
|
参考文献 |
47-49 |
|
第二章 桃“新白花”离体转化体系的建立 |
49-55 |
|
1 材料与方法 |
49-50 |
|
1．1 材料 |
49 |
|
1．2 外植体的消毒及无菌培养体系的建立 |
49-50 |
|
1．3 培养基及培养条件 |
50 |
|
1．4 数据分析 |
50 |
|
2 结果与分析 |
50-53 |
|
2．1 不同消毒剂对外植体消毒效果的比较 |
50-51 |
|
2．2 不同激素配比对桃离体培养的影响 |
51-52 |
|
2．3 枝芽的生根 |
52-53 |
|
3 讨论 |
53 |
|
参考文献 |
53-55 |
|
第三章 番茄“宝大906”离体转化体系的建立 |
55-70 |
|
1 材料与方法 |
55-57 |
|
1．1 材料 |
55 |
|
1．2 培养基及培养条件 |
55-56 |
|
1．3 无菌苗的获得与接种培养 |
56 |
|
1．4 植株再生 |
56 |
|
1．5 抗生素选择压的确定 |
56 |
|
1．6 根癌农杆菌感受态的制备及其转化(氯化钙法) |
56 |
|
1．7 农杆菌介导法转化番茄 |
56-57 |
|
1．8 PCR方法检测转基因植株 |
57 |
|
2 结果与分析 |
57-67 |
|
2．1 不同激素浓度对子叶和下胚轴离体培养形态的影响 |
57-59 |
|
2．2 不同激素配比对愈伤组织诱导的影响 |
59-61 |
|
2．3 不同6-BA／NAA配比对外植体不定芽分化的影响 |
61-64 |
|
2．4 植株再生 |
64 |
|
2．5 潮霉素选择压的确定 |
64-65 |
|
2．6 农杆菌转化与转化体的筛选 |
65-67 |
|
2．7 PCR方法检测转基因植株 |
67 |
|
3 讨论 |
67-68 |
|
3．1 影响番茄离体培养外植体分化的因素 |
67-68 |
|
3．2 影响番茄农杆菌介导的基因转化效率的因素 |
68 |
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参考文献 |
68-70 |
|
全文结论 |
70-71 |
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附录一 主要缩略词表 |
71-72 |
|
附录二 培养基的配方 |
72-73 |
|
致谢 |
73 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.159301 |
