野生稻基因组文库抗性基因的筛选和鉴定-禾谷类作物-论文之家

您现在的位置：硕士论文 >> 农业论文 >> 农作物 >> 禾谷类作物 >> 正文

野生稻基因组文库抗性基因的筛选和鉴定

Form: 论文之家作者：杲修杰 Publish: 2007-10-18 Hits:-

【中文题名】

野生稻基因组文库抗性基因的筛选和鉴定

【英文题名】

Isolation and Characterization of Resistance Gene from Wild Rice Genomic Library

【学科专业】

生物医学工程

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-10-18

【中关键词】

野生稻,抗性基因,菌落杂交,基因组文库,候选基因,

【英关键词】

wild rice,resistance gene,colony hybridization,genomic library,candidate gene,

【分类导航】

农业科学>农作物>禾谷类作物>稻>野生稻>

【论文摘要】

野生稻基因组中含有大量的抗性基因,是水稻遗传改良的重要基因来源。但野生稻遗传背景复杂,通过常规的基因克隆方法获取有利基因存在许多问题,效率极低。野生稻大片段基因组文库为野生稻优良基因的发掘和利用提供了新的技术平台,但野生稻基因组文库中克隆数目多在一万个以上,逐个进行遗传转化工作量巨大,为更快更好地发掘和利用野生稻的种质资源,我们进行了如下的研究: (1)通过反复优化杂交实验条件,我们建立了用菌落杂交法筛选野生稻基因组文库抗性基因的实验体系,并用阳性对照对实验体系进行了鉴定,证实了该方法应用于野生稻基因组文库筛选的可行性。 (2)基于植物的抗性基因具有保守序列,我们根据现有抗性基因的保守序列设计并制备了两种探针,利用菌落杂交的方法对东乡野生稻和小粒野生稻的可转化大片段基因组文库进行了筛选,总共得到49个阳性克隆,并已用于栽培稻的遗传转化。 (3)对部分阳性克隆进行了PCR鉴定,并将回收的片段进行了TA克隆及测序分析,共获得五条序列。序列比对显示,所得的五条序列与已克隆的抗性基因有较高的同源性,据此推断我们所得到的序列为候选抗性基因的序列。该筛选体系的建立,为我们发掘野...

【论文题纲】

摘要	9-10
ABSTRACT	10-11
第一章引言	11-13
第二章国内外研究现状	13-25
2.1 野生稻资源的分类与现状	13-16
2.1.1 野生稻的生物学分类	13-14
2.1.2 中国野生稻资源的分布与现状	14
2.1.3 野生稻的有利性状	14-16
2.2 野生稻有利性状的利用	16-20
2.2.1 野生稻的抗病虫性状利用	16-17
2.2.2 野生稻抗逆性状利用	17
2.2.3 野生稻的产量性状利用	17-18
2.2.4 野生稻细胞质雄性不育、恢复性利用	18-19
2.2.5 野生稻其它有利性状利用	19-20
2.3 候选基因策略及其应用	20-22
2.3.1 候选基因的概念	20
2.3.2 候选基因方法在基因克隆中的应用	20-21
2.3.3 候选基因方法在水稻分子育种中的应用	21-22
2.4 大片段基因组文库研究进展	22-23
2.5 利用全基因组基因嵌入突变体库发掘野生稻有利基因	23-25
第三章材料与方法	25-34
3.1 实验材料	25-28
3.1.1 野生稻、文库与菌株	25
3.1.2 试剂与用品	25
3.1.3 实验所用引物	25-27
3.1.4 主要仪器设备	27-28
3.2 实验方法	28-34
3.2.1 野生稻基因组总DNA 的制备	28
3.2.2 SDS 碱裂解小量制备法抽提质粒DNA	28-29
3.2.3 DH10B 感受态细胞的制备	29
3.2.4 抗性基因同源序列的扩增及探针制备	29-31
3.2.5 基因组文库杂交膜的制备	31
3.2.6 基因组文库的杂交筛选	31-32
3.2.7 杂交膜的洗脱	32
3.2.8 阳性克隆的鉴定及测序	32-34
第四章结果与分析	34-45
4.1 探针的制备	34-37
4.1.1 总DNA 的提取	34
4.1.2 引物的选择	34-35
4.1.3 简并引物最佳退火温度的确定	35-36
4.1.4 探针的制备及检测	36-37
4.2 膜的制备及杂交筛选	37-38
4.3 杂交阳性克隆的鉴定	38-45
4.3.1 阳性克隆的PCR 鉴定	38-39
4.3.2 回收片段的克隆及测序	39-41
4.3.3 序列分析	41-45
第五章讨论	45-47
第六章结束语	47-48
致谢	48-49
参考文献	49-55
作者在学期间取得的学术成果	55-56
附录A 缩略词	56-57
附录B 实验所用溶液配方	57-58

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.156950



付费论文：有参考文献 300元

1、注册会员 2、购买本文 3、下载文章
注:此文为收费论文，需付费购买。每页大约1000字。

代写论文流程

载入中…

Web lunwenjia


热门搜索：野生稻论文抗性基因菌落杂交基因组文库候选基因

禾谷类作物最新论文

禾谷类作物热门论文