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抗麻痹性贝毒素GTX2，3单克隆抗体的制备及特性分析

作者：唐琦 Publish: 2005-10-27 Hits:-

【中文题名】

抗麻痹性贝毒素GTX2，3单克隆抗体的制备及特性分析

【英文题名】

Preparation and Character Analysis of Monoclonal Antibodes Against GTX2,3

【学科专业】

遗传学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2005-10-27

【中关键词】

GTX2,3,单克隆抗体,间接ELISA,,

【英关键词】

GTX2,3,monoclonal antibody,indirect ELISA,

【分类导航】

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【论文摘要】

目的:建立抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体杂交瘤细胞系,制备抗GTX2,3单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法:利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。以GTX2,3-BSA免疫小鼠,应用杂交瘤技术建立分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。用体内诱生腹水法生产GTX2,3腹水型单克隆抗体。对所得阳性杂交瘤细胞作染色体分析并对单克隆抗体进行特性分析。结果:获得三株稳定分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株E9:F4、E9:F10、E9:G9。间接ELISA法检测E9:F10细胞株腹水抗体效价为1.4×10~(-5)。结论:醛化法能使毒素GTX2,3与载体蛋白偶联。半抗原GTX2,3与载体蛋白偶联后作为免疫原,可制备抗GTX2,3抗血清和单克隆抗体。

【论文题纲】

英文缩略词表	5-7
中文摘要	7-8
英文摘要	8-9
第一部分前言	9-17
1.1 赤潮及赤潮危害	9-10
1.2 麻痹性贝毒	10-12
1.3 目前检测毒素的方法	12-15
1.4 单克隆抗体	15
1.5 本实验研究思路及技术路线	15-17
第二部分材料与方法	17-29
2.1 实验材料	17-21
2.1.1 主要仪器设备	17
2.1.2 主要试剂	17-18
2.1.3 主要试剂配制方法	18-21
2.2 实验方法	21-29
2.2.1 反相高效液相色谱法分析毒素	21-22
2.2.2 完全抗原GTX2,3-BSA的制备	22
2.2.3 免疫小鼠	22
2.2.4 采集、保存及检测抗血清	22-23
2.2.5 饲养细胞的制备	23-24
2.2.6 细胞融合	24-25
2.2.7 反相间接血凝法初步筛选阳性孔	25
2.2.8 间接ELISA法检测培养上清及腹水	25-26
2.2.9 单克隆抗体特异性分析	26
2.2.10 有限稀释法克隆化	26
2.2.11 杂交瘤细胞染色体分析	26-27
2.2.12 杂交瘤细胞的冻存及复苏	27
2.2.13 腹水型单克隆抗体的制备及检测	27-29
第三部分结果	29-36
3.1 反相高效液相色谱法分析毒素结果图	29-30
3.2 检测抗血清	30-31
3.3 融合克隆率	31
3.4 细胞融合后阳性细胞株的筛选	31-32
3.5 有限稀释法克隆化	32-33
3.6 单克隆抗体特异性分析	33
3.7 杂交瘤细胞染色体分析图	33-34
3.8 腹水型单克隆抗体的效价检测	34-36
第四部分讨论	36-43
4.1 GTX2,3与载体的偶联	36-38
4.1.1 反相高效液相色谱法分析毒素	36
4.1.2 完全抗原GTX2,3-BSA的制备	36-38
4.2 抗血清的制备	38-39
4.3 杂交瘤的制备	39-40
4.4 单克隆抗体特异性分析	40
4.5 杂交瘤的克隆化及冻存和复苏	40-41
4.6 腹水型单克隆抗体的生产与纯化	41-43
展望	43-44
参考文献	44-48
致谢	48

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.84441



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