| 【中文题名】 | 胶州湾超微型浮游真细菌16s rDNA RFLP 分析相关技术的研究 |
| 【英文题名】 | Studies on PicoPlanktonic eu-Bacteria 16s rDNA Character of RFLP and Relevant methods in Jiaozhou Bay |
| 【学科专业】 | 水产养殖 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2001-7-1 |
| 【中关键词】 | 浮游真细菌,PCR,TA克隆,RFLP,, |
| 【英关键词】 | Planktonic eu-Bacteria,PCR,TA clone,RFLP, |
| 【分类导航】 | 生物科学>普通生物学>水生生物学>水生生物生态学和地理学>水生生物分布与水生生物地理学>水体环境分布 |
| 【论文摘要】 |
通过生态学与分子生物学相结合的方法，对胶州湾超微型浮游真细
菌从16s rDNA的角度分析其多样性，建立了一系列行之有效的方法，对
于今后开展特定的超微型生物的研究提供了有益的借鉴。主要结果如
下：
1.建立了行之有效的从极稀密度的海水中提取浮游细菌总基因组
DNA的方法，其得率约为0.3～0.5μg/L海水，并且提供了DNA
浓缩、纯化的一系列步骤，最后所制得的DNA其纯度和含量足以
开展后续工作。
2.建立了可靠的具有较高转化效率的感受态细胞，并从多个途径来
制备，并对各种方法的成败及注意事项进行了探讨。
3.对PCR反应的条件进行了深入的探讨，成功地从混合型基因组中
扩增出细菌特异性引物（Universal 1406R和Eubacterial 68F）所对
应的16s rDNA。并且对PCR的几个控制因子进行了分析，对于今
后采用不同引物的高效扩增将提供有益的帮助。
4.深入地对TA克隆效率进行了探讨，较好地将PCR混合产物分离
开，并成功地导入大肠杆菌DH5α菌株，... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
3-4 |
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英文摘要 |
4-5 |
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第一部分： 综述 |
5-15 |
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第二部分： 材料与方法 |
15-30 |
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1． 采样站点 |
15 |
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2． 试剂与仪器 |
15-16 |
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3． 样品的富集 |
16 |
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4． 大肠杆菌基因组DNA的提取 |
16-17 |
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5． 样品总DNA的提取 |
17-19 |
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6． Sangon UNIQ—5柱离心式DNA胶回收试剂盒回收DNA步骤 |
19 |
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7． PCR |
19-23 |
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8． 构建DNA文库 |
23-30 |
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第三部分 结果与讨论 |
30-36 |
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1． 感受态细胞的转化效率 |
30-31 |
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2． PCR结果 |
31-33 |
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3． 克隆结果 |
33-36 |
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参考文献 |
36-39 |
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附录 |
39-40 |
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致谢 |
40 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.39424 |
