| 【中文题名】 | 人GIDRP88选择性剪接体的鉴定和功能研究 |
| 【英文题名】 | Identification and Function Investigation of an Alternative Splicing for Human GIDRP88 |
| 【学科专业】 | 生物化学与分子生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2005-10-8 |
| 【中关键词】 | GIDRP88A,选择性剪接,序列分析,亚细胞定位,瞬时转染,基因表达 |
| 【英关键词】 | GIDRP88A,alternative splicing,sequence analysis,sbcellular localization,transient infection,gene expression,Escherichia coli,activity detection, |
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| 【论文摘要】 | 生长抑制和分化相关蛋白88(growth inhibition and differentiation related protein 88,GIDRP88)基因是在研究抗癌药物作用机理时,通过抑制消减杂交等技术获得的,初步认为该基因与肿瘤分化、生长和细胞周期相关。实验提示该基因存在不同的表达形式,可能是选择性剪接体,但是还需要进一步证实。
本学位论文报道了一个与细胞生长和分化相关的新基因GIDRP88A的克隆和研究结果,GIDRP88A是未知功能基因GIDRP88的选择性剪接形式。采用RT-PCR技术扩增GIDRP88,然后采用3'-RACE和5'-RACE方法,从乳腺癌细胞MDA-MB-231扩增到一个GIDRP88的新剪接型全长cDNA,其全长为2416bp,命名为GIDRP88A。生物信息学分析表明,GIDRP88A基因的选择性剪接位点都位于阅读框内,其全长cDNA比GIDRP88短约1kb,其中6号外显子缺失和5号外显子部分缺失,并在5号外显子缺失部位多出一个碱基A,导致终止密码子提前出现;GIDRP88A基因所编码的蛋白质与GIDRP88相比在C-端少了566个氨基酸残基,而GIDRP... |
| 【论文题纲】 |
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图形目录 |
4-5 |
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表格目录 |
5-6 |
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研究论文:人GIDRP88选择性剪接体的鉴定和功能研究 |
6-47 |
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中文摘要 |
6-8 |
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英文摘要 |
8-10 |
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1 引言 |
10-11 |
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2 材料和方法 |
11-25 |
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2．1 材料 |
11-15 |
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2．2 方法 |
15-25 |
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3 结果 |
25-39 |
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3．1 GIDRP88A全长cDNA的克隆 |
25-29 |
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3．2 GIDRP88A的ORF序列和染色体定位 |
29 |
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3．3 GIDRP88A的基因结构分析 |
29 |
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3．4 GIDRP88A的假定蛋白质序列分析和功能 |
29-31 |
|
3．5 GIDRP88A的组织表达分析 |
31 |
|
3．6 GST/GIDRP88A Ab融合蛋白的表达和抗体的制备 |
31-34 |
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3．7 ORF的验证 |
34-35 |
|
3．8 GIDRP88A的亚细胞定位 |
35-36 |
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3．9 原核表达的GIDRP88A对癌细胞的生长抑制 |
36-39 |
|
4 讨论 |
39-43 |
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4．1 GIDRP88A全长cDONA的克隆 |
39 |
|
4．2 GIDRP88A的生物信息学分析 |
39-40 |
|
4．3 GIDRP88A的RT-PCR分析 |
40-41 |
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4．4 GIDRP88A的阅读框的验证 |
41 |
|
4．5 GIDRP88A的亚细胞定位 |
41-42 |
|
4．6 GIDRP88A的原核表达产物对肿瘤细胞的抑制 |
42-43 |
|
小结 |
43-44 |
|
参考文献 |
44-47 |
|
文献综述:基因功能的研究方法 |
47-86 |
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摘要 |
48-49 |
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引言 |
49 |
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1 生物信息学方法 |
49-55 |
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1．1 针对核酸序列的预测方法 |
50-52 |
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1．2 针对蛋白质的预测方法 |
52-55 |
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2 基因转导技术 |
55-58 |
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2．1 非病毒性表达载体 |
55-57 |
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2．2 病毒表达载体 |
57-58 |
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3 反义技术 |
58-65 |
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3．1 反义寡核昔酸技术 |
58-63 |
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3．2 反义RNA技术 |
63-64 |
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3．3 核酶(Ribozyme)技术 |
64-65 |
|
4 基因敲除和基因打靶技术 |
65-69 |
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4．1 基因敲除 |
66-68 |
|
4．2 基因打靶技术 |
68-69 |
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5 人工染色体的转导 |
69-71 |
|
6 RNA干扰-基因功能研究的新途径 |
71-76 |
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6．1 RNAi的发现 |
71-72 |
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6．2 RNA干扰的作用机理 |
72 |
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6．3 RNA干扰的作用特点 |
72-73 |
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6．4 RNA干扰产生和导入方式 |
73-75 |
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6．5 RNA干扰在基因功能研究上的应用 |
75-76 |
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7 结束语 |
76-77 |
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参考文献 |
77-86 |
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声明 |
86-87 |
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致谢 |
87 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.174402 |
