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| 【中文题名】 | 炭疽杆菌保护性抗原的克隆表达、纯化及鉴定 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【英文题名】 | The Cloning, Expression, Purification and Identification of Bacillus Anthracis Protective Antigen | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【学科专业】 | 医学免疫学 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【论文级别】 | 硕士论文 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【投稿时间】 | 2006-11-30 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【中关键词】 | 保护性抗原PA,原核表达,包涵体,变性,复性, | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【英关键词】 | protective antigen,E.coli expression,inclusion body,refolding, | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【分类导航】 | 医药、卫生>基础医学>医学免疫学>>> | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【论文摘要】 | 目的:选择编码炭疽杆菌保护性抗原PA(protective antigen)的基因Pag,以炭疽杆菌A16R菌株为模板,克隆炭疽杆菌Pag基因,构建表达载体并在原核细胞中进行功能性表达,为炭疽杆菌亚单位疫苗的研制提供基础。 方法:参考Pet-32a载体序列多克隆位点,根据Pag基因序列设计引物,通过聚合酶链反应技术(PCR)获得目的片段,测序正确后构建到原核表达载体Pet-32a,构建载体命名Pet-32a-PA。转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过ELISA和Western-Blot等方法进行特异性鉴定。 结果:构建出Pet-32a-PA表达载体,经DNA序列分析和双酶切鉴定证实质粒构建正确,并均能在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达内表达。其表达形式为包涵体,经过变性、纯化、复性后通过ELISA和Western-Blot证实得到了具有活性的PA蛋白。 结论:成功构建出Pet-32a-PA表达载体,其蛋白表达产物经过复性后具有活性,为炭疽亚单位疫苗的研制提供了基础。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 【论文题纲】 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.175260 |
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