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湖南省日本血吸虫DNA多态性的研究

作者：刘伟 Publish: 2006-11-1 Hits:-

【中文题名】

湖南省日本血吸虫DNA多态性的研究

【英文题名】

Studies on Polymorphism in the DNA Fragments of Schistosoma Japonicum from Hunan Province

【学科专业】

预防兽医学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2006-11-1

【中关键词】

日本血吸虫,核糖体DNA,内转录间隔区（ITS）,cox1,nad4,聚合酶链反应

【英关键词】

Schistosoma japonicum,Ribosomal DNA,internal transcribed spacer,Cytochrome c oxidase subunit 1,NADH dehydrogenase subunit 4,polymerase chain reaction,sequence analysis,genetic variation,

【分类导航】

医药、卫生>基础医学>医学寄生虫学>医学蠕虫学>>

【论文摘要】

对湖南省日本血吸虫DNA多态性进行研究，旨在阐明湖南省日本血吸虫种内的遗传变异，为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。采用PCR扩增、克隆、测序和序列分析等方法对湖南省日本血吸虫核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)序列、线粒体(mtDNA)NADH脱氢酶亚单位Ⅳ基因(nad4)和细胞色素c氧化酶笫Ⅰ亚基(cox1)序列的多态性进行研究。结果表明：1．首次在国内报道湖南省长沙及岳阳钱粮湖农场日本血吸虫ITS序列，其中日本血吸虫ITS-1全序列的报道是国际上首次。与GenBanK中收录的日本血吸虫部分ITS-1及ITS-2全序列做比较，发现它们之间有一定差异。2．nad4基因序列的PCR扩增引物是作者根据GenBanK中收录的日本血吸虫与肝片吸虫的nad4基因序列设计的一对兼并引物，扩增片段为500bp左右。日本血吸虫nad4基因序列的报道在国内是首次。不同的代表性样品nad4序列差异明显，碱基差异在1.0％～2.9％之间。3．cox1基因序列分析表明，采自湖南岳阳君山、岳阳汨罗的样品cox1序列之间有一定差异，碱基差异在0.2％～1.2％之间。本研究证明了ITS、nad4及c...

【论文题纲】

中文摘要	4-5
英文摘要	5-6
英文缩写	6-8
目录	8-11
前言	11-22
第一章湖南省日本血吸虫内转录间隔区DNA多态性的研究	22-43
1 材料与方法	22-29
1.1 材料	22-23
1.1.1 虫体样品材料	22
1.1.2 工程菌	22
1.1.3 载体	22
1.1.4 酶类及试剂	22-23
1.2 方法	23-29
1.2.1 虫体的处理和DNA提取	23-24
1.2.2 日本血吸虫rDNA ITS片断的扩增	24-25
1.2.3 PCR扩增产物的回收与纯化	25-26
1.2.4 PCR纯化产物的连接与转化	26-27
1.2.5 重组质粒的鉴定	27-29
1.2.6 日本血吸虫样品的rDNA ITS片段的序列测定	29
1.2.7 DNA序列分析	29
2 结果与分析	29-39
2.1 PCR扩增日本血吸虫rDNA ITS片段	29-30
2.2 ITS片段的克隆与鉴定结果	30-32
2.2.1 ITS基因SjCS菌液PCR电泳图及酶切电泳图	30-31
2.2.2 ITS基因SjQLH菌液PCR电泳图及酶切电泳图	31-32
2.3 测序结果及分析	32-39
2.3.1 ITS基因片段的测序结果	32
2.3.2 测序结果分析	32-37
2.3.3 序列差异性分析	37-38
2.3.4 序列相似性分析及遗传关系分析	38-39
3 讨论	39-43
第二章湖南省日本血吸虫线粒体nad4基因的多态性研究	43-53
1 材料与方法	43-47
1.1 材料	43
1.1.1 虫体样品材料	43
1.1.2 工程菌	43
1.1.3 主要试剂	43
1.2 方法	43-47
1.2.1 虫体的处理和DNA提取	43-44
1.2.2 日本血吸虫mtDNA nad4片段的扩增	44-45
1.2.3 PCR扩增产物的回收与纯化	45
1.2.4 PCR纯化产物的连接与转化	45-46
1.2.5 重组质粒的鉴定	46-47
1.2.6 日本血吸虫样品nad4基因片段的序列测定	47
1.2.7 DNA序列分析	47
2 结果与分析	47-51
2.1 PCR扩增日本血吸虫mtDNA nad4片段	47
2.2 重组nad4的菌液PCR鉴定及重组质粒的酶切鉴定	47-48
2.3 测序结果及分析	48-51
2.3.1 nad4基因片段的测序结果	48-49
2.3.2 测序结果分析	49-50
2.3.3 序列差异性分析	50-51
2.3.4 序列相似性分析及遗传关系分析	51
3 讨论	51-53
第三章湖南日本血吸虫线粒体cox1基因多态性研究	53-62
1 材料与方法	53-55
1.1 材料	53
1.1.1 虫体样品材料	53
1.1.2 工程菌	53
1.1.3 主要试剂	53
1.2 方法	53-55
1.2.1 虫体的处理和DNA提取	53
1.2.2 日本血吸虫mtDNA cox1片段的扩增	53-54
1.2.3 PCR扩增产物的回收与纯化	54
1.2.4 PCR纯化产物的连接与转化	54-55
1.2.5 重组质粒的鉴定	55
1.2.6 日本血吸虫样品cox1基因片段的序列测定	55
1.2.7 DNA序列分析	55
2 结果与分析	55-59
2.1 PCR扩增日本血吸虫mtDNA cox1片段	55-56
2.2 重组cox1的菌液PCR鉴定及重组质粒的酶切鉴定	56-57
2.3 测序结果及分析	57-59
2.3.1 cox1基因片段的测序结果	57
2.3.2 测序结果分析	57-58
2.3.3 序列差异性分析	58
2.3.4 序列相似性分析及遗传关系分析	58-59
3 讨论	59-62
全文结论	62-63
参考文献	63-72
附录	72-76
致谢	76-77
作者简介及硕士期间发表的论文	77-79

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.175304



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