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鼠李糖乳杆菌的筛选、鉴定及加工特性研究

作者：薛银刚 Publish: 2007-2-7 Hits:-

【中文题名】

鼠李糖乳杆菌的筛选、鉴定及加工特性研究

【英文题名】

【学科专业】

生物化学与分子生物学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-2-7

【中关键词】

益生菌,鼠李糖乳杆菌,16S,rRNA,系统发育树,

【英关键词】

Probiotic,Lactobacillus rhamnosus,16S rRNA,Phylogenetic dendrogram,

【分类导航】

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【论文摘要】

益生菌在促进人体健康和防止疾病发生中发挥着重要的作用。本论文从大量分离获得的乳酸菌菌株中,筛选具有优良特性的益生菌,并对其进行鉴定,为研究和开发具有自主知识产权的益生菌产品奠定基础。本论文从三个方面开展研究:即乳酸菌功能特性研究,以筛选获得性能良好的益生菌;对筛选获得的益生菌进行鉴定;益生菌加工特性研究。对分离的乳酸菌进行耐酸和耐胆汁酸盐试验,供试的15个菌株都能在pH3、0.3%胆汁酸盐中存活;供试菌株中有10个能在pH2、0.3%胆汁酸盐中存活5h,其中Q菌的生长情况最好,其耐受能力最强;在pH3、0.2%胆汁酸盐下只有Q菌能继续生长。对分离的乳酸菌进行了抑制致病性大肠杆菌和幽门螺旋杆菌的试验,通过研究供试菌株对大肠杆菌均有抑制作用,抑制作用最强的为Q菌,抑菌圈直径12.6mm,超过对照菌株BB-12的8mm。供试菌株大部分对幽门螺旋杆菌有抑制作用,抑制作用最强的为B菌,抑菌圈直径13mm,其次为Q菌12.7mm,对照菌株BB-12为9.8mm。对分离的乳酸菌进行了体外粘附能力试验,通过研究,供试菌株中对Caco-2细胞粘附能力最高的为A菌,其粘附平均值为...

【论文题纲】

中文摘要	5-7
Abstract	7-10
1 引言	10-28
1.1 益生菌概述	10-18
1.1.1 益生菌的定义	10
1.1.2 益生菌作用的基本理论	10-11
1.1.3 益生菌的特征	11-13
1.1.3.1 益生菌一般特性的研究	12
1.1.3.2 在胃肠转运过程中的耐受性	12-13
1.1.4 国内外益生菌的研究动态	13-18
1.1.4.1 益生菌种类	13-16
1.1.4.2 益生菌存在的问题	16
1.1.4.3 国内外研究方向	16-18
1.2 乳杆菌分类鉴定研究进展	18-25
1.2.1 乳杆菌分类鉴定方法	18-21
1.2.1.1 经典分类时期	18
1.2.1.2 化学分类时期	18-20
1.2.1.3 数值分类时期	20
1.2.1.4 分子分类时期	20-21
1.2.2 16S rRNA 序列分析的理论依据及方法	21-24
1.2.2.1 16S rRNA 序列分析的理论依据	21-22
1.2.2.2 16S rRNA 序列分析的原理及方法	22-23
1.2.2.3 16S rRNA 在乳杆菌鉴定方面的研究进展	23-24
1.2.3 乳杆菌分类鉴定的发展趋势	24-25
1.3 研究目的和意义	25-26
1.4 主要研究内容	26-28
2 材料与方法	28-43
2.1 主要材料与设备	28-32
2.1.1 试验材料	28
2.1.2 主要试剂及培养基	28-31
2.1.2.1 主要试剂	28-29
2.1.2.2 培养基	29-31
2.1.3 主要仪器设备	31-32
2.2 研究方法	32-43
2.2.1 供试菌株的活化	32-33
2.2.1.1 乳酸菌的活化	32
2.2.1.2 致病性大肠杆菌的活化	32
2.2.1.3 幽门螺旋杆菌的活化	32-33
2.2.2 益生菌的筛选	33-36
2.2.2.1 耐酸和耐胆汁酸盐试验	33
2.2.2.2 抑菌试验	33-35
2.2.2.3 粘附能力试验	35-36
2.2.2.4 抗氧化试验	36
2.2.3 益生菌的初步鉴定	36-37
2.2.3.1 形态学观察	36
2.2.3.2 生理生化特性鉴定	36
2.2.3.3 代谢产物分析	36-37
2.2.4 益生菌16S rRNA 序列同源性分析	37-41
2.2.4.1 基因组 DNA 的提取	37
2.2.4.2 PCR 扩增16S rDNA	37-38
2.2.4.3 16S rDNA 的克隆	38-39
2.2.4.4 数据分析——同源性分析和系统发育树的构建	39-41
2.2.5 RAPD 筛选特异性分子标记	41-42
2.2.5.1 提取基因组 DNA	41
2.2.5.2 RAPD 扩增条件优化	41-42
2.2.5.3 菌株水平上具有鉴别力的 RAPD 随机引物的筛选	42
2.2.6 鼠李糖乳杆菌的加工特性研究	42-43
3 结果与分析	43-72
3.1 益生菌的筛选	43-56
3.1.1 耐酸和耐胆汁酸盐试验	43-46
3.1.2 抑菌试验	46-50
3.1.2.1 对致病性大肠杆菌抑制作用	46-49
3.1.2.2 对幽门螺旋杆菌抑制作用	49-50
3.1.3 粘附能力试验	50-55
3.1.3.1 不同乳酸菌单菌株对Caco-2 细胞的粘附	51-53
3.1.3.2 乳酸菌与大肠杆菌对细胞的竞争性粘附	53-55
3.1.4 抗氧化试验	55-56
3.2 益生菌的初步鉴定	56-57
3.2.1 菌落形态和细胞形态及培养特性	56
3.2.2 生理生化特性	56
3.2.2.1 碳水化合物的代谢	56
3.2.2.2 过氧化氢酶测定	56
3.2.3 乳杆菌代谢产物分析	56-57
3.3 16S rRNA 序列同源性分析结果	57-66
3.3.1 基因组 DNA 提取	57
3.3.2 16S rDNA 扩增、克隆及测序	57-61
3.3.3 16S rRNA 序列在线BLAST 结果	61
3.3.4 16S rRNA 同源性分析及系统发育树的建立	61-63
3.3.5 16S rDNA 部分序列分析	63-66
3.4 RAPD 筛选特异性分子标记	66-70
3.4.1 基因组DNA 提取	67-68
3.4.2 RAPD 扩增条件优化	68
3.4.3 菌株水平上具有鉴别力的 RAPD 随机引物的筛选	68-70
3.5 鼠李糖乳杆菌的加工特性研究	70-72
3.5.1 发酵特性研究	70
3.5.2 贮藏特性研究	70-71
3.5.3 冷冻和干燥能力研究	71-72
4 结论	72-75
4.1 益生菌的筛选	72-73
4.1.1 耐酸和耐胆汁酸盐试验	72
4.1.2 抑制致病性大肠杆菌试验	72
4.1.3 抑制幽门螺旋杆菌试验	72
4.1.4 粘附能力试验	72-73
4.1.5 抗氧化能力试验	73
4.2 益生菌的初步鉴定	73
4.3 16S rRNA 同源性分析在乳杆菌鉴定中的应用	73-74
4.4 RAPD 筛选特异性分子标记	74
4.5 鼠李糖乳杆菌 LV108 加工特性的初步研究	74-75
参考文献	75-81
致谢	81-82
攻读硕士期间发表的论文	82

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.175753



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