膝沟藻毒素GTX2，3单克隆抗体的制备、鉴定及酶免疫检测方法的初步建立
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膝沟藻毒素GTX2，3单克隆抗体的制备、鉴定及酶免疫检测方法的初步建立
作者：罗辉武 Publish: 2007-4-20 Hits:-
【中文题名】 膝沟藻毒素GTX2，3单克隆抗体的制备、鉴定及酶免疫检测方法的初步建立
【英文题名】 Production and Characterization of Monoclonal Antibodies Against GTX2,3 and the Primary Development of Enzyme-linked Immunosorbent Assay for the Detection of GTX2,3
【学科专业】 免疫学
【论文级别】 硕士论文
【投稿时间】 2007-4-20
【中关键词】 膝沟藻毒素,单克隆抗体,酶免疫检测法,,,
【英关键词】 GTX2,3,McAbs,ELISA,
【分类导航】 医药、卫生>基础医学>医学免疫学>>>
【论文摘要】 目的：制备膝沟藻毒素2，3(GTX2，3)的单克隆抗体(McAbs)，并对其进行鉴定，初步建立起GTX2，3的间接及直接竞争酶免疫学检测方法(ELISA)，为该毒素酶免疫学快速检测试剂盒的研制奠定基础。 方法：利用醛化法将GTX2，3与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联，制备完全抗原。以GTX2，3-KLH作为免疫原免疫Balb／C小鼠，同时用高碘酸盐氧化法将该毒素与葡萄糖氧化酶(GOX)偶联，得到的GTX2，3-GOX偶联物作为检测抗原。应用杂交瘤技术制备抗GTX2，3的单克隆抗体。常规方法鉴定该单克隆抗体的亚类及亲和力，间接ELISA检测腹水中抗体效价和抗体的特异性，Protein A亲和层析纯化腹水中单克隆抗体。初步建立检测该毒素的间接竞争、直接竞争酶免疫学检测方法，比较两种方法的灵敏度、检测限、工作范围。 结果：分别用醛化法和高碘酸盐氧化法成功制备出GTX2，3-KLH和GTX2，3-GOX偶联物；获得一株稳定分泌抗GTX2，3单克隆抗体的杂交瘤细胞株CD1，该细胞株分泌的抗体属于IgG1，腹水中抗体效价为2.5×10~5，亲和力为1.2×10~(-8)mol／1，该抗体与...
【论文题纲】
摘要 5-6
ABSTRACT 6-8
第一部分 前言 8-16
1.1 赤潮及赤潮危害 8-9
1.2 赤潮毒素 9-10
1.3 麻痹性贝类毒素 10-12
1.4 膝沟藻毒素 12
1.5 麻痹性贝类毒素的检测方法 12-14
1.6 国内外研究现状 14-15
1.7 本实验研究思路及技术 15-16
第二部分 材料与方法 16-27
一 实验材料 16-21
1. 主要仪器和试剂 16-17
2. 主要溶液的配制方法 17-21
二 实验方法 21-27
1. GTX2，3单克隆抗体的制备 21-24
1.1 毒素 GTX2，3与载体蛋白的偶联及偶联物的鉴定 21-22
1.2 动物免疫及免疫后血清的检测 22-23
1.3 细胞融合及融合后筛选 23
1.4 腹水型单克隆抗体的制备 23-24
2. GTX2，3单克隆抗体的鉴定 24-26
2.1 杂交瘤细胞的染色体数目分析 24
2.2 腹水中抗体效价的检测 24
2.3 腹水中抗体浓度的测定 24-25
2.4 抗体亚类的鉴定 25
2.5 抗体的亲和力测定 25
2.6 抗体的特异性鉴定 25
2.7 腹水中抗体的SDS-PAGE鉴定 25-26
3. GTX2，3酶免疫学检测方法的初步建立 26-27
3.1 GTX2，3间接竞争酶免疫学检测方法的初步建立 26
3.2 直接竞争酶免疫学检测方法的初步建立 26-27
第三部分 实验结果 27-39
1. GTX2，3单克隆抗体的制备 27-32
1.1 GTX2，3与载体蛋白偶联 27-29
1.2 免疫小鼠血清的检测 29-30
1.3 细胞融合及融合后筛选 30-32
2. 单克隆抗体的鉴定 32-34
2.1 杂交瘤细胞的染色体数目分析 32
2.2 腹水中抗体效价的测定 32
2.3 腹水中抗体浓度的测定 32-33
2.4 抗体亚类的鉴定 33
2.5 抗体的亲和力测定 33
2.6 抗体的特异性鉴定 33-34
2.7 抗体的亲和层析及SDS-PAGE鉴定 34
3. GTX2，3免疫学检测方法的初步建立 34-39
3.1 GTX2，3间接竞争酶免疫学检测方法的初步建立 34-37
3.2 直接竞争酶免疫学检测方法的初步建立 37-39
第四部分 讨论 39-43
1. 关于 GTX2，3与载体蛋白的偶联 39
2. 有关小鼠免疫及免疫血清的检测 39-40
3. 关于细胞融合及融合后筛选 40-41
4. 关于腹水型单克隆抗体的制备及鉴定 41
5. 关于免疫学检测方法的初步建立 41-43
第五部分 结论与展望 43-44
参考文献 44-47
英文缩略词表 47-49
硕士期间发表的论文 49-50
致谢 50
【DOI】 LunWen.ID:2.2008.175912
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