水痘—带状疱疹病毒疫苗株在Vero细胞中传代适应及ELISA检测血清IgG研究-基础医学-论文之家

水痘—带状疱疹病毒疫苗株在Vero细胞中传代适应及ELISA检测血清IgG研究

作者：庞宇 Publish: 2007-5-29 Hits:-

【中文题名】

水痘—带状疱疹病毒疫苗株在Vero细胞中传代适应及ELISA检测血清IgG研究

【英文题名】

Adaptation and Passages of Varicella-Zoster Virus Vaccine Strain in Vero Cell Cultures and Establishment of ELISA to Detect IgG in Serum

【学科专业】

制药工程

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-5-29

【中关键词】

水痘-带状疱疹病毒疫苗株,Vero细胞,传代与适应,亲和层析,VZV糖蛋白ELISA,VZV全病毒ELISA

【英关键词】

Vaccine strain of Varicella-Zoster virus,Vero cell,Adaptation and passages,VZV gpELISA,VZV VAR ELISA,

【分类导航】

医药、卫生>基础医学>医学免疫学>>>

【论文摘要】

水痘是由水痘-带状疱疹病毒(Varicella-Zoster virus ,VZV)引发的世界性传染疾病。为了研制疫苗和有效诊断水痘,本文研究了VZV疫苗株在Vero细胞中传代适应、制备VZV抗原工艺和ELISA方法。将VZV疫苗株在Vero细胞中连续传代培养,传至第9代时,CPE明显增多,病毒滴度从2～3 log PFU/ml提高到≧4.2 log PFU/ml,能在超低温条件下稳定保存,表明毒株获得了适应性,可用于制备VZV抗原。培养条件试验表明,15L瓶旋转培养的适宜MOI(接种比例,logPFU/cell)为0.01,收获时间在60～96h。收获病变细胞,经超声破碎、离心,制备了VZV全病毒ELISA(VAR ELISA)抗原。用Triton X-100裂解,通过Lentil Lectin Sephrose 4B亲和层析纯化,制备了VZV糖蛋白ELISA( gpELISA)抗原,具有VZV特异性糖蛋白。两种抗原的稀释度达1:3000～1:4000。研究了VZV VAR ELISA和gpELISA的反应条件,建立了相应的方法学。两种抗原最适使用稀释度为1:4000,pH7....

【论文题纲】

摘要	3-4
ABSTRACT	4-8
前言	8-9
第一章文献综述	9-19
1.1 水痘-带状疱疹病毒概况	9
1.2 水痘流行病学	9-11
1.2.1 临床表现与易感人群	9-10
1.2.2 传播途径与流行特征	10-11
1.3 水痘治疗与预防	11-12
1.4 VZV 诊断方法	12-13
1.4.1 临床诊断	12
1.4.2 VZV 血清学诊断	12-13
1.5 VZV 生物学特性	13-15
1.5.1 形态特征	13
1.5.2 基因组	13
1.5.3 糖蛋白	13-14
1.5.4 特性与培养	14-15
1.6 VZV 毒种及培养细胞的选择	15-17
1.6.1 人胚肺二倍体成纤维细胞	15
1.6.2 VZV 减毒疫苗北京候选株	15-16
1.6.3 Vero 细胞	16-17
1.6.4 毒种适应的可行性与研究基础	17
1.7 本文的研究内容与意义	17-19
第二章毒种适应及大规模培养	19-31
2.1 实验材料	19-20
2.1.1 病毒株、细胞系	19
2.1.2 试剂和培养基	19-20
2.1.3 主要仪器	20
2.1.4 培养方法	20
2.2 实验方法	20-23
2.2.1 Vero 细胞的培养及传代	20-21
2.2.2 2BS 细胞的培养及传代	21
2.2.3 VZV 病毒在 Ver o 细胞中的传代适应	21
2.2.4 毒种制备及-70℃保存的稳定性	21
2.2.5 VZV 疫苗 Vero 细胞适应毒株最适培养条件的选择	21-22
2.2.6 VZV 疫苗 Vero 细胞适应毒株的蚀斑滴定方法	22
2.2.7 无菌试验	22
2.2.8 支原体检测	22
2.2.9 VZV 疫苗 Vero 细胞适应毒株的大规模培养	22-23
2.3 实验结果	23-30
2.3.1 VZV 疫苗株在 Vero 细胞中的传代适应	23-27
2.3.2 毒种在-70℃保存的稳定性	27
2.3.3 病毒最适培养条件的选择	27-28
2.3.4 VZV 疫苗 Vero 细胞适应毒株滴定的蚀斑	28-29
2.3.5 支原体检测	29
2.3.6 无菌试验	29
2.3.7 VZV 疫苗 Vero 细胞适应毒株的大规模培养	29-30
2.4 讨论	30
2.5 小结	30-31
第三章 VZV 全病毒和糖蛋白抗原的制备及纯化研究	31-44
3.1 实验材料	31-32
3.1.1 血清	31
3.1.2 主要试剂	31
3.1.3 主要仪器	31-32
3.2 实验方法	32-36
3.2.1 制备 VZV 全病毒抗原	32
3.2.2 制备 VZV 糖蛋白裂解物	32-33
3.2.3 VZV 糖蛋白裂解物的纯化	33-34
3.2.4 蛋白质含量测定	34
3.2.5 SDS-PAGE 电泳	34-35
3.2.6 ELISA 间接法测定抗原活性	35-36
3.3 实验结果	36-42
3.3.1 VZV 全病毒抗原和糖蛋白裂解物的制备	36-37
3.3.2 VZV 糖蛋白的纯化过程	37-39
3.3.3 VZV 糖蛋白纯化各组分的EILSA 抗原活性	39-41
3.3.4 洗脱峰蛋白质含量	41
3.3.5 VZV 糖蛋白的分子量	41-42
3.4 讨论	42-43
3.5 小结	43-44
第四章 VZV ELISA 检测血清 IgG 方法的建立和应用	44-60
4.1 实验材料	44-45
4.1.1 血清	44
4.1.2 主要试剂	44-45
4.1.3 主要仪器	45
4.2 实验方法	45-46
4.2.1 用ELISA 间接法检测IgG	45-46
4.3 实验结果	46-58
4.3.1 VZV gpELISA 抗原最适使用浓度测定	46-47
4.3.2 VZV VAR ELISA 抗原最适使用浓度测定	47
4.3.3 包被缓冲液的选择	47-48
4.3.4 封闭条件的选择	48-49
4.3.5 VZV gpELISA 酶结合物工作浓度测定	49-50
4.3.6 HRP 作用底物的选择	50-51
4.3.7 抗体反应时间的选择	51-52
4.3.8 酶标抗体反应时间的选择	52-53
4.3.9 方法的特异性和敏感性	53-54
4.3.10 方法重现性	54-56
4.3.11 VZV ELISA 检测IgG 方法的应用	56-58
4.4 讨论	58-59
4.5 小结	59-60
第五章结论与展望	60-62
5.1 结论	60
5.2 展望	60-62
参考文献	62-67
论文发表	67-68
致谢	68

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.175933



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