重组梅毒螺旋体抗原TpN17的纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测-基础医学-论文之家

重组梅毒螺旋体抗原TpN17的纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测

作者：李芳 Publish: 2007-8-29 Hits:-

【中文题名】

重组梅毒螺旋体抗原TpN17的纯化及基于金磁微粒梅毒螺旋体抗体的检测

【英文题名】

Purification of Recombinant Treponema Pallidum Antigen TpN17 and Immunoassay for Treponema Pallidum Antibodies Using GoldMag Particles

【学科专业】

细胞生物学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-8-29

【中关键词】

梅毒螺旋体,重组抗原TpN17,纯化,金磁微粒,梅毒螺旋体抗体,免疫学检测

【英关键词】

Treponema pallidum,recombinant antigen TpN17,purification,GoldMag particles,Treponema pallidum antibody,immunoassay,

【分类导航】

医药、卫生>基础医学>医学免疫学>>>

【论文摘要】

梅毒是严重危害人类健康的传染病之一，其病原体为梅毒螺旋体(Treponema pallidum，Tp)。血清梅毒抗体水平是诊断梅毒螺旋体感染的主要指标，传统方法包括性病实验室研究试验、荧光螺旋体吸收试验和梅毒螺旋体血球凝集试验等。近年来，以酶标板为载体的梅毒螺旋体IgM和IgG抗体的检测已被用于临床检验和血站血液筛查。本研究工作包括两个部分：1．梅毒螺旋体抗原TpN17在毕赤酵母中的表达与纯化。2．以金磁微粒为载体，利用纯化得到的TpN17抗原和市售梅毒螺旋体混合抗原(TpN15，TpN17，TpN47)建立针对梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心检测方法。通过甲醇诱导，毕赤酵母表达系统中表达重组梅毒螺旋体抗原TpN17，样品经饱和硫酸铵沉淀粗提后，以阳离子层析交换柱对表达的TpN17进行进一步纯化。结果表明，样品经硫酸铵沉淀、PB复溶后以阳离子交换层析柱进行纯化，NaCl浓度梯度洗脱，可获得纯度大于90％的重组梅毒螺旋体抗原TpN17。Bradford法测定蛋白浓度为0.66 mg／mL。用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶(HRP)标记到抗原TpN17上，双抗原夹心法测定HRP-TpN17滴度为1：3，...

【论文题纲】

中文摘要	4-6
ABSTRACT	6-11
缩略词表	11-12
引言	12-14
第一章文献综述	14-32
1 梅毒的研究进展	14-18
1.1 梅毒的流行病学	14-15
1.2 梅毒螺旋体生物学特征和结构	15-17
1.3 致病机理及临床表现	17-18
2 梅毒螺旋体的检测	18-22
2.1 梅毒螺旋体病原学检测	18-19
2.1.1 暗视野显微镜法	18-19
2.1.2 梅毒螺旋体镀银染色法	19
2.1.3 梅毒螺旋体免疫荧光染色法	19
2.2 梅毒螺旋体血清学检测	19-22
2.2.1 非特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验	20
2.2.2 特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验	20-22
3 梅毒螺旋体抗原及其在梅毒螺旋体抗体检测中的应用	22-24
4 免疫磁珠及其应用	24-32
4.1 磁分离酶联免疫法原理	26-28
4.2 磁分离酶联免疫法的应用	28-29
4.3 金磁微粒及在免疫学检测中的应用	29-32
第二章重组梅毒螺旋体抗原TpN17的纯化	32-47
1 材料与方法	32-38
1.1 材料	32-35
1.1.1 试剂与样品	32-34
1.1.2 仪器	34-35
1.2 方法	35-38
1.2.1 毕赤酵母菌株GS115对重组体pPIC9K-Tpp17的表达	35
1.2.2 确定TpN17抗原最佳(NH_4)_2SO_4沉淀饱和度	35
1.2.3 离子交换层析条件的选择与样品的预处理	35-37
1.2.4 SDS-PAGE分析纯化结果	37-38
1.2.5 纯化抗原的浓度测定	38
1.2.6 纯化抗原的标记及其滴度测定	38
2 结果与讨论	38-45
2.1 TpN17抗原最佳(NH_4)_2SO_4沉淀饱和度	38-39
2.2 层析系统的选择	39-41
2.2.1 上样缓冲液pH值的选择	39-40
2.2.2 洗脱缓冲液离子强度的选择	40-41
2.3 纯化过程的放大	41-42
2.4 与商品化抗原的SDS-PAGE对比	42-43
2.5 纯化抗原的浓度测定	43-44
2.6 HRP标记TpN17抗原及其滴度测定	44-45
2.6.1 标记步骤	44
2.6.2 双抗原夹心法测定标记抗原滴度	44-45
3 结论	45-47
第三章以金磁微粒为载体检测梅毒螺旋体抗体	47-64
1 材料与方法	47-51
1.1 材料	47-48
1.1.1 试剂与样品	47-48
1.1.2 仪器	48
1.2 方法	48-51
1.2.1 应用金磁微粒检测梅毒螺旋体抗体的原理	49
1.2.2 固定	49-50
1.2.3 封闭	50
1.2.4 双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体基本步骤	50
1.2.5 双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体条件的优选	50-51
1.2.6 献血者筛查中的初步应用	51
2 结果与讨论	51-62
2.1 金磁微粒的性质及抗原在其表面的固定化	51-52
2.2 TpN17抗原用于双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体	52-55
2.2.1 检测梅毒螺旋体抗体条件的优选	52-53
2.2.2 与商品化TpN17抗原的比较	53
2.2.3 献血筛查中的初步应用	53-55
2.3 商品化抗原TpN47、TpN17和TpN15用于双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体	55-62
2.3.1 封闭缓冲液的选择	55-56
2.3.2 固定抗原量和HRP-标记抗原最佳工作浓度的选择	56-57
2.3.3 温育时间的选择	57-58
2.3.4 临界值的确定	58-59
2.3.5 检测系统的灵敏度分析	59-60
2.3.6 方法的精密度分析	60-61
2.3.7 系统的特异性分析	61-62
3 结论	62-64
全文小结	64-65
参考文献	65-75
致谢	75

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.176297



付费论文：有参考文献 300元

1、注册会员 2、购买本文 3、下载文章
注:此文为收费论文，需付费购买。每页大约1000字。

代写论文流程

载入中…

Web lunwenjia


热门搜索：梅毒螺旋体论文重组抗原TpN17 纯化金磁微粒梅毒螺旋体抗体免疫学检测

基础医学最新论文

基础医学热门论文