| 【中文题名】 | 变异乙型肝炎表面抗原在毕赤酵母中的克隆表达及表面抗原诊断试剂的评价 |
| 【英文题名】 | Cloning and Expression of Mutant Hepatitis B Surface Antigen in Pichia Pastoris and Their Recognition by Commercial Detection Assay |
| 【学科专业】 | 病原生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-9-27 |
| 【中关键词】 | 乙型肝炎病毒,表面抗原变异,诊断试剂,ELISA,, |
| 【英关键词】 | Hepatitis B virus,HBsAg mutant,immunoassay,ELISA, |
| 【分类导航】 | 医药、卫生>基础医学>医学免疫学>>> |
| 【论文摘要】 |
乙型肝炎是一种对公共健康危害严重的疾病。近年来随着乙型肝炎疫苗和抗病毒药物的广泛使用，乙型肝炎病毒的感染和传播得到了有效的防止。但是，乙型肝炎的防治是一项长期而艰巨的任务，随着对乙肝病毒研究的深入，一些新的问题不断被发现，如免疫后人群，抗病毒药物治疗的患者中以及慢性HBV感染的人群中都出现了HBV表面抗原的变异。这些变异对免疫诊断试剂提出了新的挑战。大量文献报道了诊断试剂对变异表面抗原的漏检。但是国内对HBV变异的流行病学及变异对国产诊断试剂影响的研究还较少。
本研究第一部分利用已构建好的野生型及3个HBV S区变异的质粒(T126N，D144A，G145R)作为模板，设计含有特定酶切位点的引物，进行PCR后用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切回收的PCR产物，连接入酵母表达质粒pPICZA和pPICZα，构建出HBV S区野生及变异酵母表达质粒。测序结果显示，读码框架及核苷酸序列均正确。
利用SalⅠ酶切构建好的6种表达质粒(胞内表达4种，分泌表达2种)使之成为线性片断。电穿孔转化P．pastroris酵母细胞GS115，用高浓度抗生素Zeocine(2000ng／ml)加压筛选出高效表达... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
3-5 |
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英文摘要 |
5-7 |
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第一部分 变异乙型肝炎表面抗原在毕赤酵母中的克隆表达 |
7-36 |
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前言 |
7-8 |
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试验材料 |
8-11 |
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实验方法 |
11-19 |
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实验结果 |
19-32 |
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讨论 |
32-35 |
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第一部分小结 |
35-36 |
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第二部分 表面抗原诊断试剂的评价 |
36-75 |
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前言 |
36-38 |
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实验材料 |
38-40 |
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实验方法 |
40-42 |
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实验结果 |
42-66 |
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讨论 |
66-73 |
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第二部分小结 |
73-75 |
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全文总结 |
75-76 |
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创新点 |
76-77 |
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参考文献 |
77-80 |
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综述 乙型肝炎病毒变异 |
80-97 |
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英文缩略语表 |
97-98 |
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致谢 |
98-99 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.176308 |
