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草麻黄体外培养及抗旱基因转化

作者：崔东亚 Publish: 2005-8-3 Hits:-

【中文题名】

草麻黄体外培养及抗旱基因转化

【英文题名】

Tissue Culture in Vitro and Drought-Resistant Gene Transformation of Ephedra Sincica

【学科专业】

植物学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2005-8-3

【中关键词】

草麻黄,愈伤组织,基因枪,转化,lea3基因,

【英关键词】

Ephedra Sinica,Callus,Gene gun,Transformation,Lea3 gene,

【分类导航】

农业科学>农作物>经济作物>药用作物>其他药用作物>

【论文摘要】

草麻黄作为传统中药市场需求量很大,但是干旱和盐碱严重制约草麻黄的产量,抗旱耐盐碱草麻黄的研制将对中草药草麻黄开发有现实经济意义。本研究以草麻黄为试材研究了草麻黄不同外植体、激素配比、基本培养基、pH值、子叶放置方式等对草麻黄愈伤组织诱导和植株再生的影响,利用基因枪转化将抗旱基因lea3导入麻黄愈伤组织细胞中,愈伤组织植株再生获得含抗旱基因lea3再生植株。草麻黄愈伤组织诱导研究表明,不同外植体来源对愈伤组织诱导结果不同,子叶和胚轴外植体来源对愈伤组织诱导效果明显好于胚根来源对愈伤组织诱导效果,三种外植体来源的愈伤组织诱导率分别为65.2%、57.4%和1.2%。培养基组成和激素配比也直接影响愈伤组织生成,最终确定草麻黄愈伤组织最佳诱导条件为MS+2,4-D1.5mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖30mg/L。在草麻黄愈伤组织悬浮培养中发现,MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+CH250mg/L+YE250mg/L+30g/L蔗糖+5g/L葡萄糖,为细胞悬浮最佳培养基。通过对草麻黄愈伤组织生长规律研究发现,愈伤组织最佳培养基成分为N6+2,4-D2.0mg/L+6-BA1....

【论文题纲】

第1章文献综述	10-21
1.1 麻黄概述	10
1.2 麻黄应用价值	10-13
1.2.1 麻黄的药用价值	10-11
1.2.2 麻黄的饲用价值	11-12
1.2.3 麻黄的生态价值	12
1.2.4 麻黄的经济价值	12-13
1.3 麻黄栽培研究进展	13-14
1.3.1 麻黄栽培研究	13
1.3.2 麻黄组织培养研究	13-14
1.3.3 麻黄雌配子离体培养	14
1.4 抗旱转基因植物研究	14-17
1.5 基因转化方法	17-19
1.5.1 基因枪	17-18
1.5.2 农杆菌介导	18-19
1.5.3 花粉管通道	19
1.6 前景展望	19-21
第2章材料与方法	21-30
2.1 材料	21-23
2.1.1 植物材料	21
2.1.2 大肠杆菌菌株及载体	21
2.1.3 试剂	21-23
2.2 草麻黄愈伤组织的诱导	23
2.2.1 草麻黄不同外植体来源和激素种类对愈伤组织诱导的影响	23
2.2.2 基本培养基对草麻黄愈伤组织诱导的影响	23
2.2.3 激素配比对草麻黄愈伤组织诱导的影响	23
2.2.4 pH和子叶放置位置对草麻黄愈伤组织诱导的影响	23
2.3 草麻黄愈伤组织继代培养	23-25
2.3.1 草麻黄愈伤组织培养条件正交试验	24
2.3.2 活性炭和pH对草麻黄愈伤组织继代培养的影响	24
2.3.3 草麻黄继代后生长规律的测定	24-25
2.4 草麻黄愈伤组织悬浮培养	25
2.5 草麻黄愈伤组织再生	25-26
2.5.1 不同激素组合对草麻黄愈伤组织植株再生的影响	25-26
2.5.2 相同激素不同激素配比对草麻黄愈伤组织植株再生的影响	26
2.5.3 基本培养基和pH对草麻黄愈伤组织植株再生的影响	26
2.6 基因枪法转化草麻黄	26-28
2.6.1 质粒提取	26
2.6.2 子弹制备	26-27
2.6.3 基因枪法进行草麻黄愈伤组织转化	27
2.6.4 除草剂筛选浓度的确定	27
2.6.5 转化愈伤组织的筛选及植株再生	27-28
2.7 转化愈伤组织再生苗PCR检测	28-30
2.7.1 草麻黄基因总DNA提取方法的选择	28-29
2.7.2 转化愈伤组织再生苗DNA的PCR检测	29-30
第3章结果与分析	30-49
3.1 外植体接种后形态变化与愈伤组织的形成	30-34
3.1.1 不同外植体类型和激素类型对愈伤组织生成的影响	30-31
3.1.2 基本培养基类型对草麻黄愈伤组织诱导的影响	31-32
3.1.3 激素配比对草麻黄愈伤组织诱导的影响	32-33
3.1.4 培养基pH对草麻黄愈伤组织诱导的影响	33
3.1.5 子叶放置位置对愈伤组织诱导的影响	33-34
3.2 草麻黄愈伤组织继代培养	34-36
3.2.1 草麻黄愈伤组织继代培养条件的选择	34-35
3.2.2 活性炭和pH对愈伤组织继代培养的影响	35-36
3.3 草麻黄愈伤组织生长曲线的测定	36-38
3.4 草麻黄的悬浮培养	38-40
3.5 草麻黄愈伤组织植株再生	40-44
3.5.1 不同激素对草麻黄愈伤组织再生的影响	40-41
3.5.2 不同激素配比对愈伤组织植株再生的影响	41
3.5.3 基本培养基对草麻黄植株再生的影响	41-42
3.5.4 pH对草麻黄愈伤组织植株再生的影响	42-44
3.6 转化草麻黄植株的获得	44-49
3.6.1 不同草麻黄总DNA提取方法比较与转化植株PCR检测	44
3.6.2 除草剂筛选浓度的确定	44-45
3.6.3 转化愈伤组织抗除草剂筛选及植株再生	45-48
3.6.4 抗旱耐盐碱转基因草麻黄植株的获得	48-49
第4章讨论	49-50
4.1 草麻黄组织培养	49
4.2 遗传转化	49-50
第5章结论	50-51
参考文献	51-57
致谢	57-58
附录	58-61

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.154892



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