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农杆菌介导的蔗糖合成酶基因转化花生的研究

作者：闻珊珊 Publish: 2007-10-10 Hits:-

【中文题名】

农杆菌介导的蔗糖合成酶基因转化花生的研究

【英文题名】

Peanut Transformation of Sucrose Synthase Gene Mediated by Agrobacterium Tumefaciens

【学科专业】

植物学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-10-10

【中关键词】

花生,蔗糖合成酶（SS）,农杆菌,转化,,

【英关键词】

Peanut,Sucrose Synthase （SS）,Agrobacteria,Transformation,

【分类导航】

农业科学>农作物>经济作物>油料作物>花生>

【论文摘要】

花生是重要的经济作物,利用基因工程技术进行花生品质的改良已经越来越引起人们的重视。本研究将自马铃薯来源的蔗糖合成酶(SS)基因序列通过农杆菌介导法转入到花生植株中,来探索外源ss基因的表达对花生植物体相关糖代谢产物的影响,并探索转化后花生植株的相关生理变化,为选育高可溶性糖含量的ss基因转化的花生植株提供基础。以花生成熟种子的子叶纵切段为外植体,经生长至对数期的农杆菌感染后转入芽诱导培养基进行共培养,此间以高浓度的细胞分裂素/生长素配比促进不定芽的分化,平均的芽分化率可达30%。继而将生长状况良好的不定芽切下转入茎伸长培养基上,以低浓度的细胞分裂素诱导茎伸长,下一步将健壮的伸长茎转入不含细胞分裂素的生根培养基中进行生根诱导。共获得了19株花生再生植株,其中5株对应于nptⅡ基因进行的PCR检测呈阳性,转化率为0.83%。对这5株阳性植株进行的糖含量检测显示有1株叶片内蔗糖含量提高了25.6%,可溶性总糖的含量及蔗糖合成酶活性并未表现显著变化。结果表明,就调节糖代谢可逆性反应的催化酶而言,在诸多因素的影响下,SS并未提升花生植株体内的可溶性总糖含量;就培养过程而言,本实验进一步完善了农杆菌介...

【论文题纲】

中文摘要	4-5
英文摘要	5-8
引言	8-14
一、SS 的基本特性和结构	8-9
二、SS 基因转化的研究进展	9-10
三、花生品质改良的重要意义及其遗传转化现状	10-13
（一）单纯筛选标记基因的转化	10-11
（二）抗逆性能的提高	11-12
（三）花生食用品质的改善	12
（四）生产疫苗的生物反应器	12-13
四、研究工作的意义和技术路线	13-14
（一）意义	13
（二）研究的主要内容	13-14
材料与方法	14-23
一、材料	14
二、实验方法	14-23
（一）表达载体p406ss-1 的鉴定与转化	14-15
（二）质粒载体p406ss-2 的构建与转化	15-17
（三）三亲杂交将载体质粒导入Ti 农杆菌	17
（四）农杆菌介导的花生转化	17-18
（五）再生植株的PCR 检测	18-19
（六）花生叶片中可溶性总糖和蔗糖含量的测定	19-20
（七） SS 的提取和活性测定	20-21
（八）植物蛋白的SDS-聚丙烯酰氨垂直电泳分析	21-23
结果	23-29
一、表达载体的检测与转化	23
二、质粒载体 p406ss-2 的构建与转化	23-24
三、农杆菌介导的花生转化	24-26
（一）转化方法	24-25
（二）花生丛生芽对卡那霉素的耐受性测试	25-26
四、再生植株的PCR 检测	26
五、阳性再生植株叶片中可溶性总糖和蔗糖含量	26-27
六、SS 的活性测定	27-28
七、植物蛋白的SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析	28-29
讨论	29-32
一、农杆菌介导花生转化的技术问题	29
（一）转化用农杆菌浓度对外植体分化的影响	29
（二）农杆菌对花生子叶外植体侵染时间的确定	29
二、共培养阶段子叶外植体的变化与芽诱导率密切相关	29-30
三、花生再生系统中的问题	30
四、叶片组织糖含量的变化	30
五、花生转化再生植株果实产量不高的问题	30-31
六、叶片组织的SS 活性变化	31-32
结论	32-33
参考文献	33-39
致谢	39

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.155858



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