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免疫球蛋白M和人绒毛膜促性腺激素的金标记免疫共振散射光谱分析

作者：邹明静 Publish: 2007-10-11 Hits:-

【中文题名】

免疫球蛋白M和人绒毛膜促性腺激素的金标记免疫共振散射光谱分析

【英文题名】

Immuno-nanogold Resonance Scattering Spectral Assay of Immunoglobulin M and Human Chorionic Gonadotrophin

【学科专业】

分析化学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-10-11

【中关键词】

免疫球蛋白M,人绒毛膜促性腺激素,共振散射,金标记,银增强,免疫共振散射光谱分析

【英关键词】

Immunoglobulin M,Human Chorionic Gonadotrophin,Resonance Scattering,nanogold labeled,Silver-enhanced,Immuno-resonance Scattering Spectral Assay,

【分类导航】

医药、卫生>临床医学>诊断学>实验室诊断>免疫学检验>

【论文摘要】

第一部分:绪论综述了胶体金的制备、表征以及胶体金标记技术在生化分析中的应用。综述了近年来共振散射技术在分析化学中的应用。介绍了免疫球蛋白M与人绒毛膜促性腺激素的分析进展。第二部分:痕量免疫球蛋白M的金标记免疫共振散射光谱分析采用柠檬酸钠改良法制备了粒径为8 nm的金纳米微粒,并用于标记羊抗人免疫球蛋白M(IgM)。在适宜pH的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中,金标记羊抗人IgM与IgM发生特异性结合,导致体系在580 nm处的共振散射峰增强,cIgM在0.0015~2.00μg/mL范围内与共振散射强度的增强值ΔI580nm成线性关系。其回归方程为ΔI580nm=39.91c+1.95 (n =7, R=0.9989),检出限(3σ)为0.98 ng/mL。该方法简单、灵敏且选择性较好,用于定量分析人血清中的免疫球蛋白M,结果满意。第三部分:金银复合纳米微粒的共振散射效应及其在IgM免疫分析中的应用采用柠檬酸钠改良法制备粒径为8 nm的金纳米微粒标记羊抗人免疫球蛋白M(IgM)。在pH4.49的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中,金标羊抗人...

【论文题纲】

中文摘要	3-5
Abstract	5-12
第一部分绪论	12-51
1 胶体金标记技术	12-19
1.1 胶体金的制备	12-13
1.1.1 柠檬酸钠还原法	12
1.1.2 改良柠檬酸钠还原法	12
1.1.3 柠檬酸三钠-鞣酸还原法	12
1.1.4 硼氢化钠还原法	12-13
1.2 胶体金的质量鉴定与表征	13-14
1.2.1 透射电镜(TEM)法	13
1.2.2 紫外-可见吸收光谱	13
1.2.3 共振散射光谱	13
1.2.4 表面增强拉曼(SERS)光谱	13-14
1.3 免疫金探针的制备	14
1.4 金标记免疫分析	14-17
1.4.1 基于固相载体的胶体金免疫快速诊断	14-16
1.4.1.1 斑点免疫金渗滤分析(DIGFA)	14-15
1.4.1.2 胶体金免疫层析分析(GICA)	15-16
1.4.2 光谱分析	16
1.4.3 电化学分析	16-17
1.5 银增强金标记技术	17-19
1.5.1 免疫金银染色法(IGSS)的光镜应用	17-18
1.5.2 银强化斑点免疫金渗滤分析	18
1.5.3 电化学分析	18-19
1.5.4 光谱分析	19
2 共振散射技术	19-26
2.1 共振散射技术在蛋白质分析中的应用	19-22
2.2 共振散射技术在核酸分析中的应用	22-25
2.3 离子缔合物的共振散射效应及其在痕量无机物和有机物分析中的应用	25-26
2.3.1 共振散射技术在药物分析中的应用	25
2.3.2 痕量金属和非金属离子的测定	25-26
2.4 共振散射技术在液相纳米微粒研究中的应用	26
3 免疫球蛋白M 的分析进展	26-29
3.1 免疫比浊法	26
3.2 放射免疫分析	26-27
3.3 酶免疫分析	27
3.4 荧光免疫分析	27
3.5 化学发光免疫分析	27
3.6 其他分析方法	27-29
4 人绒毛膜促性腺激素的分析进展	29-31
4.1 胶体金免疫层析技术	29
4.2 放射免疫分析	29
4.3 电化学免疫分析	29
4.4 化学发光免疫分析	29-30
4.5 荧光免疫分析	30-31
5 本课题研究的工作内容	31-32
6 本课题研究意义	32
7 参考文献	32-51
第二部分痕量免疫球蛋白 M 的金标记免疫共振散射光谱分析	51-66
1 引言	51-52
2 实验部分	52-54
2.1 仪器与试剂	52
2.2 胶体金的制备与质量鉴定	52
2.3 免疫金探针的制备	52-53
2.3.1 胶体金p H 值的调节	52-53
2.3.2 羊抗人IgM 用量的确定	53
2.3.3 羊抗人IgM 的胶体金标记	53
2.4 免疫共振散射实验方法	53-54
3 结果与讨论	54-63
3.1 透射电镜图	54-55
3.2 吸收光谱	55-56
3.3 共振散射光谱	56-58
3.4 试剂浓度的影响	58-59
3.4.1 pH 值、缓冲溶液用量的选择	58-59
3.4.2 金标记羊抗人 IgM 的影响	59
3.4.3 聚已二醇的影响	59
3.5 温育时间的影响	59-61
3.6 线性关系	61
3.7 共存物质的影响	61-62
3.8 样品的测定	62-63
4 参考文献	63-66
第三部分金银复合纳米微粒的共振散射效应及其在IgM免疫分析中的应用	66-89
1 引言	66-67
2 实验部分	67-69
2.1 仪器与试剂	67-68
2.2 胶体金的制备与质量鉴定	68
2.3 免疫金探针的制备	68-69
2.3.1 胶体金p H 值的调节	68
2.3.2 羊抗人IgM 用量的确定	68-69
2.3.3 羊抗人IgM 的胶体金标记	69
2.4 实验方法	69
3 结果	69-82
3.1 透射电镜图	69-70
3.2 激光散射图	70-71
3.3 吸收光谱	71-73
3.4 共振散射光谱	73-75
3.5 金标记免疫反应条件的选择	75-77
3.5.1 缓冲溶液种类、pH 值及用量的选择	75
3.5.2 金标记羊抗人 IgM 用量的选择	75-76
3.5.3 温育时间的选择	76-77
3.6 银加强条件对体系的影响	77-80
3.6.1 缓冲溶液pH 值、用量的选择	77
3.6.2 胶体金免疫复合物上清液用量的影响	77
3.6.3 乙酸银用量的影响	77-78
3.6.4 对苯二酚用量的影响	78
3.6.5 离心转速及时间的影响	78-79
3.6.6 银加强时间的影响	79-80
3.7 线性关系	80
3.8 共存物质的影响	80-81
3.9 样品的测定	81-82
4 讨论	82-85
4.1 Cl-的影响	83-84
4.2 银纳米微粒的影响	84
4.3 金纳米微粒的催化作用	84-85
4.4 金银复合微粒吸收峰红移	85
5 参考文献	85-89
第四部分金标记免疫共振散射光谱法检测痕量人绒毛膜促性腺激素	89-107
1 引言	89-90
2 实验部分	90-93
2.1 仪器与试剂	90
2.2 胶体金的制备与质量鉴定	90-91
2.3 免疫金探针的制备	91-93
2.3.1 胶体金p H 值的调节	91
2.3.2 兔抗hCG 用量的确定	91-92
2.3.3 兔抗hCG 的胶体金标记	92-93
2.4 实验方法	93
3 结果与讨论	93-104
3.1 透射电镜图	93-94
3.2 吸收光谱	94-95
3.3 共振散射光谱	95-97
3.4 试剂浓度的影响	97-100
3.4.1 pH 值、缓冲溶液用量的选择	97
3.4.2 金标记兔抗hCG 的影响	97
3.4.3 聚已二醇的影响	97-100
3.5 温育时间的影响	100-101
3.6 线性关系	101
3.7 共存物质的影响	101-102
3.8 样品的测定	102-104
4 参考文献	104-107
第五部分银增强金标记免疫共振散射光谱法检测痕量人绒毛膜促性腺激素	107-127
1 引言	107-108
2 实验部分	108-110
2.1 仪器与试剂	108
2.2 胶体金的制备与质量鉴定	108
2.3 免疫金探针的制备	108-109
2.3.1 胶体金p H 值的调节	108-109
2.3.2 兔抗hCG 用量的确定	109
2.3.3 兔抗hCG 的胶体金标记	109
2.4 实验方法	109-110
3 结果与讨论	110-124
3.1 透射电镜图	111
3.2 共振散射光谱	111-112
3.3 金标记免疫反应条件的选择	112-115
3.3.1 缓冲溶液pH 值及用量的选择	112-113
3.3.2 金标记兔抗hCG 用量的选择	113-114
3.3.3 温育时间的选择	114-115
3.4 银加强条件对体系的影响	115-120
3.4.1 缓冲溶液pH 值、用量的选择	115-116
3.4.2 胶体金免疫复合物上清液用量的影响	116-117
3.4.3 乙酸银用量的影响	117
3.4.4 对苯二酚用量的影响	117-118
3.4.5 离心转速及时间的影响	118-119
3.4.6 银加强时间的影响	119-120
3.5 线性关系	120
3.6 共存物质的影响	120-121
3.7 样品的测定	121-124
4 参考文献	124-127
总结	127-129
攻读硕士学位期间发表的主要论文题录	129-130
致谢	130-132

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.178184



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