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大菱鲆病原菌的鉴定及哈维氏弧菌溶血素的克隆

作者：颜显辉 Publish: 2004-11-2 Hits:-

【中文题名】

大菱鲆病原菌的鉴定及哈维氏弧菌溶血素的克隆

【英文题名】

The Identification of Bacterial Pathogen from Turbot(Scophthalmus Maximus) and Clone of Hemolysin Gene from Vibrio Harveyi

【学科专业】

海洋生物学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2004-11-2

【中关键词】

大菱鲆,病原菌,鉴定,16SrDNA,哈维氏弧菌,溶血素

【英关键词】

Scophthalmus maximus,pathogen,identification,6SrDNA,Vibrio harveyi,hemolysin,

【分类导航】

农业科学>水产、渔业>水产保护学>鱼病学>>

【论文摘要】

从病大菱鲆中分离到九株菌VA-1、VA-2、VA-3、VH-1、VI-1、ET-1、EN-1、MA-1和PA-1。经形态及生理生化鉴定，VA-1、VA-2、VA-3为鳗弧菌，VH-1为哈维氏弧菌，VI-1为肠弧菌，ET-1为迟缓爱德华氏菌，EN-1属于肠球菌属，MA-1属于海单胞菌属，PA-1属于交替单胞菌属。对九株菌的16SrDNA序列进行了扩增、克隆、测序和序列分析。序列分析结果显示，VA-1、VA-2、VA-3和鳗弧菌01和02a血清型亲缘关系最近；VH-1和哈维氏弧菌的亲缘关系最近；VI-1和肠弧菌的亲缘关系最近；ET-1和迟缓爱德华氏菌的亲缘关系最近；EN-1与肠球菌亲缘关系最近；PA-1与假交替单胞菌亲缘关系最近；而MA-1与海单胞菌亲缘关系较远。综合考虑形态及生理生化特征和16SrDNA序列分析结果，可以判定VA-1、VA-2、VA-3为鳗弧菌，VH-1为哈维氏弧菌，VI-1为肠弧菌，ET-1为迟缓爱德华氏菌，EN-1属于肠球菌属，PA-1属于假交替单胞菌属，而MA-1还需进一步鉴定。腹腔注射感染实验表明，VA-1、VA-2、VA-3和ET-1对大菱鲆都有很强的致病性...

【论文题纲】

中文摘要	7-9
英文摘要	9-11
第一章文献综述	11-33
1 前言	11-12
2 鱼类细菌病原种类	12-15
3 细菌致病因子	15-22
3.1 粘附相关因子	15-17
3.2 毒力质粒及铁吸收系统	17-18
3.3 溶血素	18-20
3.4 次晶体表面蛋白层	20
3.5 脂多糖	20-21
3.6 外膜蛋白	21-22
4 病原菌的检测	22-24
4.1 特定基因片段的PCR检测技术	22
4.2 DNA指纹技术	22-23
4.3 16SrRNA检测技术	23-24
4.4 其它的检测技术	24
5 细菌性疾病的控制	24-27
5.1 选用遗传上抗病力较强的品种	24-25
5.2 合理的养殖管理方式	25
5.3 选用中草药	25
5.4 选用抗菌药物	25-26
5.5 疫苗的使用	26
5.6 免疫增强剂的使用	26
5.7 微生物管理及有益菌的利用	26-27
参考文献	27-33
第二章大菱鲆疑似病原菌的形态及生理生化鉴定	33-50
1 弧菌的鉴定	33-41
1.1 材料与方法	33-34
1.1.1 菌株的来源	33
1.1.2 培养基	33
1.1.3 实验方法	33-34
1.2 结果	34-41
2 爱德华氏菌的鉴定	41-43
2.1 材料与方法	41
2.1.1 菌株的来源	41
2.1.2 培养基	41
2.1.3 实验方法	41
2.2 结果	41-43
3 肠球菌的鉴定	43-46
3.1 材料与方法	43-44
3.1.1 菌株的来源	43
3.1.2 培养基	43
3.1.3 实验方法	43-44
3.2 结果	44-46
4 海单胞菌和交替单胞菌的鉴定	46-48
4.1 材料与方法	46
4.1.1 菌株的来源	46
4.1.2 培养基	46
4.1.3 实验方法	46
4.2 结果	46-48
5 讨论	48-49
5.1 弧菌的鉴定	48
5.2 其它菌的鉴定	48-49
参考文献	49-50
第三章疑似病原菌16SrDNA的克隆及序列分析	50-63
1 16SrDNA基因的扩增	50-53
1.1 材料与方法	50-53
1.1.1 菌株	50-51
1.1.2 培养基	51
1.1.3 试剂及仪器	51
1.1.4 引物设计及合成	51
1.1.5 细菌染色体DNA的提取	51-52
1.1.6 16SrDNA的扩增	52
1.1.6.1 PCR反应体系	52
1.1.6.2 PCR反应条件	52
1.1.7 扩增产物的检测	52-53
1.2 结果	53
2 16SrDNA的克隆	53-61
2.1 材料与方法	53-57
2.1.1 实验菌株	53
2.1.2 培养基	53
2.1.3 试剂及仪器	53-54
2.1.4 目的基因的纯化	54
2.1.5 目的基因与载体的连接	54
2.1.6 感受态细胞的制备	54-55
2.1.7 质粒的转化	55
2.1.8 质粒的提取	55-56
2.1.9 阳性克隆的鉴定	56-57
2.1.9.1 内切酶的选择	56
2.1.9.2 双酶切反应	56-57
2.2 16SrDNA序列的测定	57
2.3 16SrDNA序列分析与比较	57
2.4 结果	57-61
2.4.1 16SrDNA的克隆及阳性克隆的鉴定	57-58
2.4.2 九株菌的16S-rDNA序列分析	58-61
3 讨论	61-62
参考文献	62-63
第四章疑似病原菌的致病性研究和药敏实验	63-74
1 材料和方法	63-64
1.1 菌株	63
1.2 实验动物	63
1.3 培养基	63
1.4 药敏纸片	63
1.5 人工感染实验	63-64
1.6 药物敏感实验	64
2 结果	64-70
2.1 疑似病原菌的致病性	64-66
2.2 疑似病原菌的药物敏感性	66-70
3 讨论	70-72
3.1 菌株对大菱鲆的致病性	70-71
3.2 菌株的药物敏感性	71-72
参考文献	72-74
第五章哈维氏弧菌溶血素的克隆及测序	74-79
1 材料与方法	74-75
1.1 菌株	74
1.2 培养基	74
1.3 试剂及仪器	74
1.4 引物设计及合成	74
1.5 溶血素基因的PCR扩增、克隆	74-75
1.6 克隆片断的DNA序列测定及分析	75
2 结果	75-77
2.1 溶血素基因PCR扩增及克隆	75-76
2.2 溶血素基因的序列分析	76-77
3 讨论	77-78
参考文献	78-79
结论	79-80
致谢	80

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.165380



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