| 【中文题名】 | 中林美荷杨组织培养及农杆菌介导的耐盐基因（NHX）遗传转化的研究 |
| 【英文题名】 | Studies on Tissue Culture of Poplar-Zhonglinmeihe and Transformation with the Salt-tolerant Gene(NHX)Mediated by Agrobacterium Tumefaciens |
| 【学科专业】 | 动物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2005-9-6 |
| 【中关键词】 | 中林美荷杨,组织培养,再生体系,NHX,基因,遗传转化 |
| 【英关键词】 | Poplar—Zhonglinmeihe.,NHX gene,Tissue culture,regeneration system,Genetic transformation,Agrobacterium tumefaciens-mediated,Salt tolerance, |
| 【分类导航】 | 农业科学>林业>森林树种>阔叶乔木>杨>其他 |
| 【论文摘要】 | 杨树分布广,适应性强,不仅是重要的经济树种,还在水土保持和维护生态平衡方面发挥着重要作用。与其它木本植物相比,其具有生长周期较短,离体操作容易,基因组相对较小的优点, 故被喻作林木中的模式植物,近年来对杨树的组织培养及基因工程研究倍受关注。
土壤盐分是制约作物产量的主要因素,它可使作物尤其是灌溉农业的作物减产。目前,世界耕种土地的大约20%和接近一半的灌溉土地都遭到了盐胁迫的危害。NHX(Na+/H+ antiporter)为液泡膜上的一种Na+/H+反向运输体,可促进钠离子分室在液泡中,同时还作为有效的渗透调节剂,减小对细胞的渗透胁迫,是植物耐盐机制中的一种。随着分子遗传学和植物转基因技术的发展,采用生物技术提高作物的耐盐能力,使作物在盐胁迫环境中能正常生长并提高作物的产量,正受到越来越多的关注,目前已取得了一定的成果。有研究报道NHX基因可显著提高转基因拟南芥、油菜和西红柿的耐盐性。
中林美荷杨是中国林科院近年来杂交培育成功的一种新的速生杨优良树种,具有生长速度快、抗寒、抗病、抗虫害等优良性状,是优质木浆原料及禽畜的优良饲料。本文以中林美荷杨当年生新枝、叶片和叶柄为外植体,建立了中林美荷杨的组织培... |
| 【论文题纲】 |
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目录 |
3-6 |
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中文摘要 |
6-8 |
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英文摘要 |
8-10 |
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缩略语 |
10-11 |
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第一部分 文献综述 |
11-33 |
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第一章 杨树组织培养及基因转化研究概述 |
11-23 |
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1. 杨树组织培养 |
11-16 |
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1.1 杨树组织培养一般概况 |
11 |
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1.2 影响杨树组织培养的因素 |
11-15 |
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1.3 组织培养在杨树上的应用 |
15-16 |
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2. 杨树基因工程研究 |
16-23 |
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2.1 遗传转化方法 |
16-18 |
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2.2 影响农杆菌转化效果的主要因素 |
18-21 |
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2.3 杨树基因工程研究近年来的应用 |
21-22 |
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2.4 杨树基因工程研究存在的问题 |
22-23 |
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2.5 展望 |
23 |
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第二章 植物耐盐机制的分子生物学研究进展 |
23-33 |
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1. 植物耐盐机制的分子生物学研究进展 |
24-31 |
|
1.1 小分子渗透调节物质的积累 |
24-26 |
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1.2 大分子蛋白类的积累 |
26-27 |
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1.3 离子摄入和区域化 |
27-30 |
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1.4 脱落酸(ABA) |
30 |
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1.5 胁迫反应基因的转录因子 |
30 |
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1.6 清除活性氧的膜保护体系 |
30-31 |
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2. 结语 |
31-33 |
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第二部分 实验部分 |
33-57 |
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第一章 中林美荷杨不定芽分化与植株再生 |
33-44 |
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1 材料与方法 |
33-36 |
|
1.1 材料 |
33 |
|
1.2 方法 |
33-36 |
|
1.2.1 外植体的表面灭菌 |
34 |
|
1.2.2 培养条件 |
34 |
|
1.2.3 实验试剂及激素 |
34 |
|
1.2.4 初代培养培养基 |
34 |
|
1.2.5 不定芽的继代培养培养基 |
34-36 |
|
1.2.6 不定芽的壮苗、生根培养 |
36 |
|
1.2.7 试管苗移栽 |
36 |
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2. 结果和分析 |
36-41 |
|
2.1 初代培养 |
36-40 |
|
2.1.1 升汞处理对外植体的影响 |
36-37 |
|
2.1.2 不同外植体不定芽诱导的情况 |
37-38 |
|
2.1.3 不同保存方式对茎段不定芽诱导的影响 |
38-39 |
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2.1.4 叶柄不定芽的初代培养 |
39-40 |
|
2.2 不定芽的继代培养 |
40-41 |
|
2.3 不定芽的壮苗、生根,炼苗、移栽 |
41 |
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3. 讨论 |
41-44 |
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第二章根癌农杆菌介导的中林美荷杨遗传转化体系的建立 |
44-57 |
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1 材料和方法 |
44-49 |
|
1.1 材料 |
44-45 |
|
1.1.1 实验材料 |
44 |
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1.1.2 培养基 |
44-45 |
|
1.2 方法 |
45-49 |
|
1.2.1 中林美荷杨Kan 最佳筛选浓度的确定 |
45 |
|
1.2.2 农杆菌的活化培养 |
45-46 |
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1.2.3 外植体的准备 |
46 |
|
1.2.4 中林美荷杨的浸染 |
46 |
|
1.2.5 三因素三水平实验设计 |
46 |
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1.2.6 AS 的添加 |
46-47 |
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1.2.7 植物基因组DNA 提取 |
47-48 |
|
1.2.8 PCR 检测 |
48 |
|
1.2.9 Kan 抗性芽的继代筛选培养及生根培养 |
48-49 |
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2 结果与分析 |
49-52 |
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2.1 中林美荷杨Kan 最佳筛选浓度的确定 |
49 |
|
2.2 三因素三水平实验结果 |
49-50 |
|
2.3 AS 的影响 |
50-51 |
|
2.4 延迟筛选的影响 |
51 |
|
2.5 筛选培养接种方式的影响 |
51-52 |
|
2.6 PCR 检测 |
52 |
|
2.7 Kan 抗性芽的继代筛选培养及生根培养 |
52 |
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3 讨论 |
52-57 |
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3.1 卡那霉素的确定 |
53 |
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3.2 菌液浓度、浸染时间及预培养对Kan 抗性芽的产生的影响 |
53 |
|
3.3 AS 的影响 |
53 |
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3.4 延迟筛选培养 |
53-54 |
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3.5 问题及分析 |
54-57 |
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结论 |
57-58 |
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参考文献 |
58-64 |
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致谢 |
64-65 |
|
个人简历 |
65-66 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.162026 |
