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组织工程化胰腺的体外构建及体内移植治疗糖尿病大鼠的实验研究

作者：孔庆学 Publish: 2007-4-4 Hits:-

【中文题名】

组织工程化胰腺的体外构建及体内移植治疗糖尿病大鼠的实验研究

【英文题名】

Research on Construction of Tissue Engineered Pancreas in Vitro and Transplantation in Vivo to Cure Diabetes in Rats

【学科专业】

临床兽医学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-4-4

【中关键词】

胰岛,睾丸支持细胞,旋转壁式生物反应器,微重力,糖尿病,

【英关键词】

pancreas islet,Sertoli cells,rotary wall vessel bioreactor,microgravity,diabetes,

【分类导航】

医药、卫生>基础医学>医用一般科学>生物医学工程>人工脏器与器官>

【论文摘要】

胰岛移植是治疗Ⅰ型即胰岛素依赖型糖尿病的一种非常有效的方法，它通过β细胞的替代治疗实现病人血糖的自我调节。但目前抑制免疫免疫排斥所使用的免疫抑制剂，给病人带来严重的副作用，实现无免疫抑制剂移植成为胰岛移植研究的一个重点。为实现无免疫抑制剂胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病，本研究利用旋转壁式生物反应器模拟的微重力条件共培养大鼠胰岛和睾丸支持细胞，以形成具有内分泌功能和免疫豁免特性的胰岛-睾丸支持细胞复合物，并对复合物的形成条件，形态，体内移植后功能、分布进行了研究。采用胶原酶单次震荡消化法获得大鼠睾丸支持细胞，采用低渗处理及差速贴壁法除去精细胞和血细胞，并通过Fas-L免疫组化染色检测其纯度。采用结扎灌注消化法及Dextran不连续密度梯度法获得纯化胰岛，并通过DTZ特异染色对其进行鉴定，计数，通过AO-PI双染色法确定胰岛细胞存活率，通过葡萄糖刺激实验检测其内分泌活性。将胰岛培养于生物反应器中，检测其活性变化。将睾丸支持细胞分别与淋巴细胞、胰岛共培养，检测其杀伤淋巴细胞的作用及对胰岛营养支持作用。将纯化的胰岛与睾丸支持细胞在旋转壁式生物反应器中共培养5 d，通过透射电镜及扫描电镜对形成的细胞复合物SICA的超微结构进行...

【论文题纲】

摘要	4-6
ABSTRACT	6-13
第一章胰岛移植的历史及发展概况	13-19
1.1 胰岛移植的定义及历史	13
1.2 胰岛移植的进展	13-14
1.3 胰岛移植存在的问题	14
1.4 免疫抑制方法研究进展	14-19
第二章胰岛移植过程	19-24
2.1 移植细胞的来源	19-21
2.1.1 同种胰岛	19
2.1.2 异种胰岛	19-20
2.1.3 胰岛干细胞	20
2.1.4 胚胎干细胞	20
2.1.5 基因工程化胰岛素分泌细胞	20-21
2.2 胰岛细胞团的分离与纯化	21-24
2.2.1 胰岛移植物的制备	21-22
2.2.2 胰岛的纯化	22
2.2.3 胰岛的移植部位	22-23
2.2.4 移植数量	23
2.2.5 手术方式	23
2.2.6 胰岛移植效果的判定	23-24
第三章大鼠胰岛的分离、纯化与检测	24-31
3.1 材料与方法	25-27
3.1.1 实验动物	25
3.1.2 主要试剂和仪器	25
3.1.3 溶液配制	25
3.1.4 胰岛的分离	25-26
3.1.5 胰岛的纯化	26
3.1.6 AO-PI双染色	26
3.1.7 DTZ染色	26
3.1.8 胰岛计数	26-27
3.1.9 葡萄糖刺激试验	27
3.2 结果	27-28
3.2.1 胰岛的纯化	27
3.2.2 DTZ染色	27
3.2.3 胰岛计数	27-28
3.2.4 AO-PI双染色	28
3.2.5 葡萄糖刺激试验	28
3.3 讨论	28-29
3.4 小结	29-31
第四章睾丸支持细胞的分离纯化与培养	31-37
4.1 材料与方法	31-33
4.1.1 实验动物	31
4.1.2 试剂	31
4.1.3 溶液配制	31
4.1.4 睾丸支持细胞的分离纯化	31-32
4.1.5 睾丸支持细胞计数及台盼蓝拒染试验	32
4.1.6 睾丸支持细胞形态学观察	32
4.1.7 睾丸支持细胞免疫组化鉴定及纯度检测	32
4.1.8 生长曲线的绘制	32-33
4.2 结果与分析	33-34
4.2.1 细胞计数及台盼蓝拒染试验	33
4.2.2 倒置显微镜观察及HE染色观察结果	33
4.2.3 透射电镜观察	33
4.2.4 Fas-L免疫组化	33-34
4.2.5 生长曲线的绘制	34
4.3 讨论	34
4.4 小结	34-37
第五章微重力环境对胰岛特性影响的研究	37-40
5.1 材料与方法	37-38
5.1.1 实验动物	37
5.1.2 主要试剂和仪器	37
5.1.3 胰岛的分离与纯化	37
5.1.4 胰岛的静态培养及微重力培养	37
5.1.5 胰岛的形态观察	37-38
5.1.6 胰岛存活率检测	38
5.1.7 胰岛素分泌功能检测	38
5.2 结果	38
5.2.1 胰岛形态观察	38
5.2.2 胰岛存活率检测	38
5.2.3 胰岛素分泌功能检测	38
5.3 讨论	38-39
5.4 小结	39-40
第六章睾丸支持细胞的免疫抑制作用及对胰岛细胞营养支持作用的研究	40-45
6.1 材料与方法	40-41
6.1.1 实验动物	40
6.1.2 主要试剂和仪器	40-41
6.1.3 睾丸支持细胞的分离、纯化及丝裂霉素处理	41
6.1.4 大鼠脾脏淋巴细胞的分离及与睾丸支持细胞共培养	41
6.1.5 睾丸支持细胞与胰岛细胞共培养	41
6.2 结果	41-42
6.2.1 睾丸支持细胞杀伤活化淋巴细胞作用	41
6.2.2 睾丸支持细胞对胰岛的营养支持作用	41-42
6.3 讨论	42-43
6.4 小结	43-45
第七章三维微重力共培养大鼠胰岛和睾丸支持细胞的实验研究	45-51
7.1 材料与方法	45-46
7.1.1 实验动物	45
7.1.2 主要试剂及仪器	45
7.1.3 胰岛的分离纯化与鉴定	45
7.1.4 睾丸支持细胞的分离纯化及鉴定	45-46
7.1.5 旋转壁式生物反应器共培养胰岛与支持细胞	46
7.1.6 SICA形态学观察	46
7.1.7 SICA免疫组化染色	46
7.1.8 透射及扫描电镜观察SICA的超微结构	46
7.1.9 萄萄糖刺激实验	46
7.2 结果	46-47
7.2.1 胰岛的分离纯化及鉴定	46
7.2.2 睾丸支持细胞分离及Fas-L免疫组化染色鉴定	46-47
7.2.3 SICA形态学观察	47
7.2.4 SICA超微结构观察	47
7.2.5 SICA免疫组化染色	47
7.2.6 SICA体外生物活性检测	47
7.3 讨论	47-48
7.4 小结	48-51
第八章胰岛与睾丸支持细胞复合物SICA体内移植实验	51-58
8.1 材料与方法	51-52
8.1.1 实验动物	51
8.1.2 主要试剂及仪器	51
8.1.3 SICA的制备和检测	51
8.1.4 建立I型糖尿病大鼠模型	51
8.1.5 细胞复合物移植	51-52
8.1.6 移植受体血糖监测及葡萄糖耐受实验	52
8.1.7 移植物检测与鉴定	52
8.2 结果	52
8.2.1 受体血糖水平	52
8.2.2 移植物HE染色及免疫组化染色	52
8.2.3 移植后血糖正常受体及正常大鼠葡萄糖耐受实验	52
8.3 讨论	52-53
8.4 小结	53-58
结论	58-59
参考文献	59-65
致谢	65-66
个人简介	66

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.205221



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