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中文摘要 |
4-5 |
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英文摘要 |
5-10 |
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引言 |
10-12 |
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第1章 文献综述 |
12-24 |
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1.1 抗旱耐盐基因及其应用 |
12-15 |
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1.1.1 1-磷酸甘露醇脱氢酶基因(mtlD)和6-磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD) |
12 |
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1.1.2 脯氨酸合成酶基因(proA)与△′-二氢吡咯-5-羧酸合成酶基因(p5cs) |
12-13 |
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1.1.3 胆碱加单氧酶基因(cmo)和甜菜碱脱氢酶基因(badh) |
13 |
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1.1.4 6-磷酸海藻糖合成酶基因(otsA)和6-磷酸海藻糖磷酸化酶基因(otsB) |
13 |
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1.1.5 胚胎发生晚期丰富蛋白基因(lea) |
13-15 |
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1.2 转基因植物的安全性和商业前景 |
15-18 |
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1.2.1 安全性问题 |
15-16 |
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1.2.2 商业前景 |
16-18 |
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1.3 苜蓿转基因研究进展 |
18-20 |
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1.3.1 在品质改良方面 |
18-19 |
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1.3.2 在抗病、虫方面 |
19 |
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1.3.3 在抗除草剂方面 |
19-20 |
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1.3.4 作为生物反应器 |
20 |
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1.3.5 在抗逆方面 |
20 |
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1.4 苜蓿转基因技术展望 |
20-22 |
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1.4.1 更为广泛和有效的目的基因的克隆 |
20-21 |
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1.4.2 载体构建 |
21 |
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1.4.3 转化 |
21 |
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1.4.4 分子检测和后代检测 |
21 |
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1.4.5 田间检测 |
21 |
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1.4.6 性状选择 |
21-22 |
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1.4.7 性状整合 |
22 |
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1.4.8 产品扩繁 |
22 |
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1.4.9 审定批准 |
22 |
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1.5 本研究的目的意义 |
22-24 |
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第2章 材料和方法 |
24-35 |
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2.1 实验材料 |
24-28 |
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2.1.1 苜蓿材料 |
24 |
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2.1.2 质粒 |
24 |
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2.1.3 主要实验仪器设备 |
24-25 |
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2.1.4 主要生化试剂 |
25-26 |
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2.1.5 主要培养基 |
26 |
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2.1.6 主要溶液配方 |
26-28 |
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2.1.7 PCR扩增引物 |
28 |
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2.2 实验方法 |
28-35 |
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2.2.1 不同品种抗盐碱能力的测定 |
28-29 |
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2.2.2 “中苜一号”转化受体系统的建立与优化 |
29-30 |
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2.2.3 基因枪转化 |
30-32 |
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2.2.4 转基因植株的检测 |
32-35 |
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第3章 结果与分析 |
35-56 |
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3.1 不同苜蓿品种抗盐碱性分析 |
35-38 |
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3.1.1 盐碱浓度对不同苜蓿种子发芽状况的影响 |
35 |
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3.1.2 盐浓度对种子成苗率的影响 |
35-36 |
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3.1.3 盐浓度对植株POD酶活的影响 |
36-37 |
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3.1.4 愈伤组织在不同盐浓度下的生长率变化 |
37 |
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3.1.5 不同苜蓿愈伤组织在不同盐浓度下的POD酶活性变化 |
37-38 |
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3.2 中苜一号苜蓿组织培养再生体系的优化 |
38-49 |
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3.2.1 外植体种类种类对愈伤组织诱导频率的影响 |
39 |
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3.2.2 激素种类对愈伤组织诱导频率的影响 |
39-40 |
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3.2.3 激素种类对愈伤组织生长率的影响 |
40-42 |
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3.2.4 激素种类和继代时间对愈伤组织状态的影响 |
42-43 |
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3.2.5 激素种类和继代时间对愈伤组织褐化水平的影响 |
43-45 |
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3.2.6 激素种类对愈伤组织分化的影响 |
45-47 |
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3.2.7 再生植株的驯化及移栽 |
47 |
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3.2.8 悬浮细胞系的建立 |
47-49 |
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3.3 基因枪转化 |
49-56 |
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3.3.1 Lea3基因工程菌最佳悬浮培养时间的确定 |
49-50 |
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3.3.2 Lea3基因的导入及抗性愈伤组织的筛选 |
50-52 |
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3.3.3 转化植株再生培养 |
52-53 |
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3.3.4 转化植株的再选择 |
53-54 |
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3.3.5 植株总DNA的PCR检测 |
54-56 |
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第4章 讨论 |
56-58 |
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4.1 品种抗盐性方面 |
56 |
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4.1.1 品种抗盐性能力 |
56 |
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4.1.2 种子中的POD酶活变化与抗盐能力的关系 |
56 |
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4.2 中苜一号组织培养再生体系 |
56-57 |
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4.2.1 愈伤组织的诱导、驯化及分化 |
56-57 |
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4.2.2 IAA和2，4-D的生理功能不完全相同 |
57 |
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4.3 对多个商业化的优良苜蓿品种进行基因工程遗传转化操作的可能性进行探索 |
57 |
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4.4 优化了基因枪进行中苜一号遗传转化的体系 |
57 |
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4.5 Bar基因作为选择基因，选择、标记的同时又具备了对除草剂的抗性 |
57-58 |
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第5章 结论 |
58-59 |
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5.1 苜蓿再生体系的建立 |
58 |
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5.2 转化 |
58-59 |
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参考文献 |
59-62 |
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致谢 |
62 |
