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利用木糖选择系统获得HAL1转基因百脉根（Lotus cirniculatus）植株及耐盐性鉴定

作者：韦正乙 Publish: 2007-10-10 Hits:-

【中文题名】

利用木糖选择系统获得HAL1转基因百脉根（Lotus cirniculatus）植株及耐盐性鉴定

【英文题名】

Obtainment of HAL1 Lotus Cirniculatus Transformants Based on Xylose Screening System and the Identification of Salt Tolerance

【学科专业】

植物学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-10-10

【中关键词】

木糖筛选系统,木糖异构酶,rd29A启动子,HAL1,耐盐性,百脉根（Lotus

【英关键词】

xylose screening system,xylose isomerse,rd29A promoter,HAL1,salt tolerance,crowtoe （Lotus cirniculatus）,genetic transformation,

【分类导航】

农业科学>农作物>饲料作物、牧草>多年生豆科牧草>五叶草（百脉根）>

【论文摘要】

随着生物技术的发展,转基因技术已经成为培育植物新品种的重要手段,许多重要性状已经通过此方法应用于生产。与此同时,公众对标记基因及其产物安全性的质疑也成为植物转基因面临的一个重要问题。所以,构建环境友好型的安全转化载体,有效控制目的基因的表达是当前植物转基因的一个发展趋势。本研究利用逆境诱导型启动子构建植物表达载体,通过安全的木糖筛选系统,用于对百脉根(Lotus cirniculatus L.)进行转化,以期提高百脉根的耐盐性。该载体以来源于大肠杆菌(Escherichia coli)的木糖异构酶基因XylA为选择标记基因。木糖异构酶(葡萄糖异构酶)广泛分布于动物和部分植物体内,而且大量应用于食品工业中,以该基因为选择标记,不存在安全性问题。该基因是以大肠杆菌基因组DNA为模板,根据报道的基因序列设计引物,用PCR方法克隆获得。经序列比较,该基因序列与报道的序列同源性为100%,其编码框全长1323bp,编码440个氨基酸。该载体利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)逆境诱导型的rd29A启动子驱动目的基因——耐盐基因HAL1。根据报道序列设计引物,从拟南芥基因组...

【论文题纲】

摘要	4-5
Abstract	5-8
1 引言	8-17
1.1 植物转基因的正向选择系统	8-10
1.1.1 激素代谢相关基因	8-9
1.1.2 糖代谢相关基因	9-10
1.2 植物启动子及其分子开关系统	10-15
1.2.1 诱导型启动子及诱导型分子开关系统	10-13
1.2.2 组织/器官特异性启动子及其分子开关系统	13-15
1.3 HAL1 的作用机制及其转基因研究	15
1.4 百脉根基因工程概况	15-17
2 材料与方法	17-31
2.1 实验材料	17-18
2.1.1 植物材料	17
2.1.2 质粒和菌种	17
2.1.3 试剂盒、酶类	17
2.1.4 培养基	17-18
2.1.5 实验所用引物	18
2.2 实验方法	18-31
2.2.1 基因克隆	18-21
2.2.2 植物表达载体的构建	21-26
2.2.3 Prd29A 活性检测	26-28
2.2.4 百脉根的木糖利用实验	28
2.2.5 农杆菌介导的百脉根转化	28-29
2.2.6 百脉根转基因再生植株的分子检测	29
2.2.7 百脉根的耐盐性鉴定	29-31
3 结果	31-43
3.1 XylA 基因克隆与序列分析	31-32
3.1.1 XylA 的克隆	31
3.1.2 XylA 的序列分析	31-32
3.2 拟南芥Prd29A 的克隆与序列分析	32-33
3.2.1 Prd29A 的克隆	32-33
3.2.2 Prd29A 的序列分析	33
3.3 耐盐基因HAL1 的扩增与序列分析	33-34
3.3.1 HAL1 的扩增	33
3.3.2 HAL1 的序列分析	33-34
3.4 植物表达载体的构建	34-37
3.4.1 pCRD::GUS 的构建	35
3.4.2 pCRD::HAL1 的构建	35
3.4.3 pBi11438-XI 的构建	35-36
3.4.4 载体pXIRD::HAL1 的构建	36-37
3.5 Prd29A 活性检测	37
3.6 百脉根的木糖利用实验	37-38
3.7 农杆菌介导的百脉根转化	38-39
3.7.1 基于除草剂筛选体系的百脉根转化	38
3.7.2 基于木糖筛选系统的百脉根转化	38-39
3.8 抗性再生植株的分子检测	39-40
3.9 百脉根的耐盐性鉴定	40-43
3.9.1 野生型百脉根的耐盐试验	40
3.9.2 转基因百脉根的耐盐性检测	40-43
4 讨论	43-47
4.1 基因克隆和载体构建	43-44
4.2 Prd29A 启动子活性检测	44
4.3 百脉根的木糖利用实验	44
4.4 农杆菌介导的百脉根转化	44-45
4.5 百脉根的耐盐鉴定	45-47
5 结论	47-48
参考文献	48-56
致谢	56

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.153863



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