| 【中文题名】 | 杨树抗虫基因转化及抗虫性研究 |
| 【英文题名】 | Studies on the Transformation of Poplar with Divalent Insect-resistant Genes and the Insect-resistance of the Transformed plants |
| 【学科专业】 | 森林培育 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2001-9-7 |
| 【中关键词】 | 杨树,抗虫性生物测定,抗虫基因,遗传转化,, |
| 【英关键词】 | poplar,insect-resistant test,insect-resistant gene,transformation, |
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| 【论文摘要】 |
为了有效解决杨树虫害问题和完善转抗虫基因植物培育技术体系，通过室内和
室外饲虫试验，研究了转基因杨树的抗虫性鉴定、抗虫效应及抗性规律；并应用基
因工程技术进行了青杨再生体系建立和双价抗虫基因的转化。
（1）转双价抗虫基因741毛白杨无性系对鳞翅目害虫的抗虫性生物测定。通过对
741毛白杨转基因无性系的抗虫性生物测定，将各无性系划分为高抗、中抗、低抗
和不抗四个等级，其中筛选出高抗和中抗无性系各3个。同时发现双价抗虫基因的
表达与气温变化密切相关。随着气温的逐渐下降，昆虫死亡率逐渐下降。试验结果
表明，各转基因无性系中昆虫的总死亡率、累计死亡率、各龄期死亡率与对照均存
在着显著差异，可以准确反映抗虫基因对昆虫的毒杀作用并体现出不同抗性无性系
杀虫特性的不同。试验还着力探讨了外源抗虫基因对测试昆虫的生长、发育的作用。
试验结果表明，转基因无性系对测试昆虫的生长发育有明显抑制作用。各转基因无
性系中蜕皮指数明显小于对照，昆虫各发育龄期历期比对照明显延长，各龄期发育
速率亦远远小于对照，显示出对昆虫发育的明显抑制作用。从昆虫体重增... |
| 【论文题纲】 |
|
中文摘要 |
4-6 |
|
目录 |
6-10 |
|
文献综述 |
10 |
|
1 杨树抗虫基因工程研究进展 |
10-19 |
|
1．1 已克隆的抗虫基因类型 |
10-12 |
|
1．1．1 苏云金杆菌晶体蛋白（或内毒素）基因Bt |
10-11 |
|
1．1．2 蛋白酶抑制剂基因PI |
11 |
|
1．1．3 外源凝集素基因 |
11 |
|
1．1．4 昆虫毒素基因 |
11 |
|
1．1．5 其它类型的抗虫基因 |
11-12 |
|
1．2 遗传转化技术 |
12-13 |
|
1．2．1 农杆菌介导法 |
12 |
|
1．2．2 PEG法 |
12 |
|
1．2．3 基因枪法 |
12-13 |
|
1．3 转基因植株的分子生物学检测 |
13 |
|
1．3．1 ELISA酶标记免疫吸附测定法 |
13 |
|
1．3．2 Southern blotting（DNA印迹法） |
13 |
|
1．3．3 Western吸印法 |
13 |
|
1．4 转基因植株的抗虫性生物测定 |
13-14 |
|
1．5 抗虫转基因杨树研究进展 |
14-15 |
|
1．6 问题与展望 |
15-18 |
|
1．6．1 最佳外植体再生体系的建立 |
15 |
|
1．6．2 遗传转化技术中存在的问题 |
15-16 |
|
1．6．3 昆虫对转基因植物产生抗性的问题 |
16-18 |
|
1．6．3．1 “高剂量/避难所”策略 |
16 |
|
1．6．3．2 基因策略 |
16-17 |
|
1．6．3．3 基因启动子及基因表达策略 |
17-18 |
|
引言 |
18-19 |
|
2 转双价抗虫基因741毛白杨的抗虫性生物测定 |
19-40 |
|
2．1 几种测试昆虫简介 |
19-21 |
|
2．1．1 杨扇舟蛾（Clostera anachoreta（Fabricius） |
19 |
|
2．1．2 美国白蛾（Hyphantria cunea（Drury）） |
19-20 |
|
2．1．3 舞毒蛾（Lymantria dispar（Linnaeus）） |
20 |
|
2．1．4 杨小舟蛾（Micromelalopha troglodyta（Graeser） |
20-21 |
|
2．1．5 古毒蛾（Orgyia antiqua（Linnaeus）） |
21 |
|
2．2 材料与方法 |
21-23 |
|
2．2．1 材料 |
22 |
|
2．2．1．1 植物材料 |
22 |
|
2．2．1．2 测试昆虫 |
22 |
|
2．2．2 方法 |
22-23 |
|
2．2．2．1 群体饲虫试验 |
22-23 |
|
2．2．2．2 单体饲虫试验 |
23 |
|
2．2．2．3 计算方法 |
23 |
|
2．3 结果与分析 |
23-38 |
|
2．3．1 转基因无性系抗虫性评价 |
23-31 |
|
2．3．1．1 转基因无性系抗虫性分级 |
23-25 |
|
2．3．1．2 高抗和中抗无性系毒杀昆虫的比较 |
25-29 |
|
2．3．1．3 各无性系抗虫性与气温的关系 |
29-31 |
|
2．3．1．4 1998—2000年昆虫总死亡率的比较 |
31 |
|
2．3．2 转基因无性系对昆虫生长发育的影响 |
31-37 |
|
2．3．2．1 昆虫的蜕皮指数 |
31 |
|
2．3．2．2 各发育龄期历期及各龄期发育速率 |
31-36 |
|
2．3．2．3 昆虫体重增长速率及蛹重 |
36-37 |
|
2．3．3 无菌试管苗与室外移栽苗的抗虫性 |
37 |
|
2．3．4 饲虫试验方法探讨 |
37-38 |
|
2．3．4．1 田间群体饲虫试验方法 |
37 |
|
2．3．4．2 美国白蛾的测试方法 |
37-38 |
|
2．3．4．3 饲虫试验中应注意的问题 |
38 |
|
2．4 结论与讨论 |
38-40 |
|
3 转基因741毛白杨对桑天牛的抗性鉴定 |
40-47 |
|
3．1 材料与方法 |
40-41 |
|
3．1．1 试验材料 |
40-41 |
|
3．1．1．1 植物材料 |
40-41 |
|
3．1．1．2 供试昆虫 |
41 |
|
3．1．1．3 试验地点 |
41 |
|
3．1．2 试验方法 |
41 |
|
3．1．2．1 树上套笼接虫方法 |
41 |
|
3．1．2．2 调查内容和方法 |
41 |
|
3．2 结果与分析 |
41-45 |
|
3．2．1 1999年树上套笼接桑天牛试验 |
41-44 |
|
3．2．2 2000年树上套笼接桑天牛试验 |
44-45 |
|
3．2．2．1 各无性系对桑天牛卵孵化率的影响 |
44 |
|
3．2．2．2 各无性系抗天牛特性的聚类分析 |
44 |
|
3．2．2．3 各无性系中幼虫蛀虫道长度比较 |
44-45 |
|
3．3 结论与讨论 |
45-47 |
|
4 青杨再生体系的建立 |
47-52 |
|
4．1 材料与方法 |
47-48 |
|
4．1．1 材料 |
47 |
|
4．1．2 方法 |
47-48 |
|
4．1．2．1 最适外植体及诱导再生培养基的筛选 |
47 |
|
4．1．2．2 芽的增殖培养 |
47 |
|
4．1．2．3 嫩茎生根培养 |
47 |
|
4．1．2．4 培养条件及所用培养基 |
47-48 |
|
4．2 结果与分析 |
48-51 |
|
4．2．1 最适外植体的筛选 |
48 |
|
4．2．2 叶片诱导体胚或不定芽再生的适宜培养基 |
48-50 |
|
4．2．3 芽的增殖培养基 |
50-51 |
|
4．2．4 嫩茎生根培养基 |
51 |
|
4．3 结论 |
51-52 |
|
5 青杨双价抗虫基因转化的研究 |
52-57 |
|
5．1 材料与方法 |
52 |
|
5．1．1 菌种与质粒 |
52 |
|
5．1．2 植物材料 |
52 |
|
5．1．3 农杆菌培养 |
52 |
|
5．1．4 双价抗虫基因转化 |
52 |
|
5．1．5 转化芽的获得 |
52 |
|
5．1．6 转化再生嫩茎生根 |
52 |
|
5．2 结果与分析 |
52-56 |
|
5．2．1 卡那霉素（Km）对青杨分化的影响 |
52-54 |
|
5．2．2 不同凝固剂对诱导不定芽的影响 |
54 |
|
5．2．3 预培养时间 |
54 |
|
5．2．4 选择压力对诱导分化的影响 |
54-55 |
|
5．2．5 光培养和暗培养 |
55 |
|
5．2．6 转化植株的获得 |
55-56 |
|
5．3 结论 |
56-57 |
|
6 主要结论 |
57-59 |
|
参考文献 |
59-65 |
|
附录 |
65-66 |
|
英文摘要 |
66-69 |
|
致谢 |
69 |
|
| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.161092 |
