| 【中文题名】 | 秸秆腐熟菌剂的细菌种群分析及其腐熟过程的动态研究 |
| 【英文题名】 | Study on Bacteria Communities of Straw-decomposing Inoculant and the Dynamic Change in the Pcocess of Fermentation |
| 【学科专业】 | 微生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-9-18 |
| 【中关键词】 | 秸秆腐熟剂,16S,rDNA克隆文库,DGGE,细菌组成, |
| 【英关键词】 | Straw-decomposing inoculant,16S rDNA clone library,DGGE,Bacteria composition, |
| 【分类导航】 | 农业科学>农业基础科学>肥料学>农家肥料>堆肥、沤肥> |
| 【论文摘要】 |
本论文以秸秆腐熟菌剂为研究对象，分别采用分子生物学方法和传统平板分离方法对其细菌菌群及在腐熟过程中的变化进行分析。采用构建16S rDNA克隆文库的方法比传统平板分离方法能够更加客观、准确的反应腐熟剂样品中细菌组成，PCR—DGGE技术是目前研究接种微生物在腐熟过程中动态变化的理想方法之一。本论文研究可为秸秆腐熟菌剂的菌种合理组成、菌剂生产与应用提供依据。论文的主要结果如下。
采用构建16S rDNA克隆文库的方法研究了目前广泛应用的样品A和B的细菌组成，结果表明样品A主要是融合乳杆菌(WeisseUa confusa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)；而样品B主要是布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)和耐酸乳杆菌(Lactobacillus acetotolerans)。对比平板分离法，采用构建16S rDNA文库的方法得到的结果更全面，也更好反映出样品中的细菌组成。
DGGE分析样品田间应用取样结果表明，堆沤和凼沤这两种发酵方... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
6-7 |
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Abstract |
7-12 |
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第一章 绪论 |
12-24 |
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1.1 秸秆及其应用现状 |
12-14 |
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1.2 秸秆还田与堆肥化处理 |
14-17 |
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1.2.1 秸秆堆肥化处理 |
14-15 |
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1.2.2 堆肥重要影响因素 |
15-17 |
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1.3 秸秆腐熟菌剂研究进展 |
17-19 |
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1.4 堆肥中的微生物生态学过程 |
19-20 |
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1.5 分子生态学在微生物多样性研究中的应用现状 |
20-22 |
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1.5.1 PCR扩增与多态分析及核苷酸序列分析 |
20 |
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1.5.2 DGGE |
20-22 |
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1.6 本论文研究的意义和日的 |
22 |
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1.7 本论文研究的内容、方法和技术路线 |
22-24 |
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1.7.1 本论文研究内容和方法 |
22-23 |
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1.7.2 本论文研究所采用的技术路线 |
23-24 |
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第二章 16S rDNA克隆文库法分析秸秆腐熟菌剂细菌组成 |
24-43 |
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2.1 实验材料 |
24-28 |
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2.1.1 秸秆腐熟菌剂 |
24 |
|
2.1.2 主要仪器设备 |
24 |
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2.1.3 本研究所用的其它菌株、质粒和引物 |
24-25 |
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2.1.4 培养基 |
25-27 |
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2.1.5 缓冲液和试剂 |
27 |
|
2.1.6 DNA提取试剂 |
27-28 |
|
2.2 实验方法 |
28-32 |
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2.2.1 总DNA的提取 |
28-29 |
|
2.2.2 DNA浓度与纯度的测定 |
29 |
|
2.2.3 16S rDNA的PCR扩增及PCR产物纯化 |
29-30 |
|
2.2.4 PCR产物的连接 |
30 |
|
2.2.5 转化 |
30 |
|
2.2.6 阳性克隆的筛选 |
30-31 |
|
2.2.7 ARDRA分型 |
31 |
|
2.2.8 构建克隆文库 |
31-32 |
|
2.3 结果与分析 |
32-42 |
|
2.3.1 样品总DNA提取结果 |
32-33 |
|
2.3.2 16S rDNA的PCR扩增结果及Reconditioning PCR扩增结果 |
33-34 |
|
2.3.3 阳性克隆的筛选与检测 |
34 |
|
2.3.4 ARDRA分型结果 |
34-36 |
|
2.3.5 构建克隆文库结果 |
36-38 |
|
2.3.6 两个样品组成菌株的系统发育树状图 |
38-41 |
|
2.3.7 采用菌落平板计数法测定的样品结果 |
41-42 |
|
2.4 本章小结 |
42-43 |
|
第三章 腐熟过程的细菌动态变化研究 |
43-50 |
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3.1 实验材料 |
43 |
|
3.1.1 取样 |
43 |
|
3.1.2 主要仪器及试剂 |
43 |
|
3.2 实验方法 |
43-46 |
|
3.2.1 DNA的提取方法 |
43-44 |
|
3.2.2 16S rDNA的V3区PCR扩增及PCR产物纯化 |
44 |
|
3.2.3 Reconditioning PCR |
44-45 |
|
3.2.4 DGGE电泳 |
45-46 |
|
3.3 结果与分析 |
46-49 |
|
3.3.1 DNA提取结果 |
46 |
|
3.3.2 16S rDNA的V3区PCR扩增 |
46-47 |
|
3.3.3 Reconditioning PCR结果 |
47 |
|
3.3.4 垂直电泳变性剂浓度的确定 |
47-48 |
|
3.3.5 三个样品的DGGE分析结果和主要目的条带的测序 |
48-49 |
|
3.4 本章小结 |
49-50 |
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第四章 水稻秸秆的小型堆肥试验 |
50-65 |
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4.1 实验材料 |
50 |
|
4.1.1 水稻秸秆和秸秆腐熟菌剂 |
50 |
|
4.1.2 主要仪器和试剂 |
50 |
|
4.2 实验方法 |
50-53 |
|
4.2.1 堆肥实验处理 |
50-51 |
|
4.2.2 堆腐过程测定的参数及其测定方法 |
51-52 |
|
4.2.3 平板计数法分析堆肥微生物 |
52 |
|
4.2.4 堆肥样品DNA提取 |
52-53 |
|
4.2.5 堆肥样品DGGE图谱 |
53 |
|
4.3 结果与分析 |
53-63 |
|
4.3.1 原料的基本理化特性 |
53 |
|
4.3.2 堆肥外观效果 |
53-54 |
|
4.3.3 堆肥各参数变化 |
54-56 |
|
4.3.4 平板培养法测定堆肥微生物的结果 |
56-60 |
|
4.3.5 DGGE分析结果 |
60-63 |
|
4.4 本章小结 |
63-65 |
|
第五章 结论与讨论 |
65-67 |
|
5.1 结论 |
65-66 |
|
5.2 讨论与展望 |
66-67 |
|
参考文献 |
67-71 |
|
致谢 |
71-72 |
|
作者简历 |
72 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.147384 |
