| 【中文题名】 | 拟组织化培养大鼠肝细胞用于药物的研究 |
| 【英文题名】 | Tissue-like Culture of Rat Hepatocytes for Research on Drugs |
| 【学科专业】 | 生物化工 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2006-5-10 |
| 【中关键词】 | 大鼠肝细胞,凝胶包埋培养,单层贴壁培养,CYP1A2,CYP2E1,药物代谢 |
| 【英关键词】 | rat hepatocytes,gel entrapment culture,monolayer culture,CYP1A2,CYP2E1,drug metabolism,drug-drug interactions,drug hepatotoxicity, |
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| 【论文摘要】 | 体外培养的原代肝细胞被广泛用于药物代谢、药物间相互作用和药物肝毒性的研究。传统的单层贴壁培养不能长期保持肝细胞功能和细胞色素酶活性,这些限制了它在药物研究中的应用。本论文将生物人工肝微型化,采用拟组织化的凝胶包埋大鼠肝细胞培养方式,从药物代谢、药物间相互作用和药物肝毒性方面研究其可行性。为了使较难获得的肝细胞充分应用于研究中,肝细胞的低温长期保存非常重要。本实验还试图寻找一种简单的方法低温冻存新鲜分离的大鼠肝细胞,并研究解冻后肝细胞的功能。本论文主要分以下四部分:
第一部分研究了凝胶包埋培养大鼠肝细胞应用于药物代谢的可行性。实验以非那西丁、对硝基苯酚和7-羟基香豆素作为底物,研究了CYP1A2、CYP2E1和Ⅱ相酶(葡萄糖转移酶和硫酸转移酶)的活性。结果发现单层贴壁培养的肝细胞酶活性下降很快,凝胶包埋培养的肝细胞在7天内能保持较高的Ⅰ相和Ⅱ相酶的活性,而且活细胞代谢酶活性比单层贴壁高1.5倍左右。以上结果表明凝胶包埋比单层贴壁培养能更好地保持药物代谢酶的活性。
第二部分评价了凝胶包埋培养大鼠肝细胞用于药物间相互作用研究的可行性。实验以β-萘黄酮(50μmol/L)作为诱导剂,研究它... |
| 【论文题纲】 |
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前言 |
9-11 |
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第一章 文献综述 |
11-23 |
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1．1 药物代谢与药物肝毒性 |
11-18 |
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1．1．1 药物代谢 |
11-16 |
|
1．1．2 药物肝毒性 |
16-18 |
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1．2 肝细胞体外培养 |
18-21 |
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1．2．1 肝细胞单层贴壁培养 |
19-20 |
|
1．2．2 肝细胞凝胶包埋培养 |
20 |
|
1．2．3 肝细胞聚球体形式培养 |
20-21 |
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1．3 肝细胞的冷冻保存 |
21-22 |
|
1．4 研究思路 |
22-23 |
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第二章 材料与方法 |
23-29 |
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2．1 实验材料、试剂及细胞培养基 |
23-25 |
|
2．1．1 主要实验器材 |
23 |
|
2．1．2 主要实验试剂 |
23 |
|
2．1．3 主要实验溶液 |
23-25 |
|
2．2 原代大鼠肝细胞收获及其培养方法 |
25-26 |
|
2．2．1 原代大鼠肝细胞的收获 |
25 |
|
2．2．2 原代大鼠肝细胞的单层贴壁培养 |
25 |
|
2．2．3 原代大鼠肝细胞的胶原凝胶包埋培养 |
25-26 |
|
2．3 大鼠肝细胞冷冻保存和复苏 |
26 |
|
2．3．1 肝细胞冷冻保存 |
26 |
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2．3．2 冻保后细胞复苏 |
26 |
|
2．4 测定及分析方法 |
26-29 |
|
2．4．1 细胞活率测定 |
26 |
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2．4．2 肝细胞药物代谢测定 |
26-27 |
|
2．4．3 肝细胞药物诱导测定 |
27 |
|
2．4．4 肝细胞药物抑制测定 |
27 |
|
2．4．5 胞内GSH含量测定 |
27-28 |
|
2．4．6 尿素和大鼠白蛋白测定 |
28 |
|
2．4．7 统计学处理 |
28-29 |
|
第三章 药物代谢的研究 |
29-35 |
|
3．1 Ⅰ相药物代谢 |
29-32 |
|
3．1．1 CYP1A2代谢能力 |
29-31 |
|
3．1．2 CYP2E1代谢能力 |
31-32 |
|
3．2 Ⅱ相药物代谢—7-羟基香豆素(7-HC)的代谢情况 |
32-33 |
|
3．3 本章小结 |
33-35 |
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第四章 药物间相互作用的研究 |
35-40 |
|
4．1 药物诱导作用 |
35-37 |
|
4．1．1 BNF对CYP1A2的诱导作用 |
35-36 |
|
4．1．2 BNF对UDP-GT和ST的诱导作用 |
36-37 |
|
4．2 药物抑制作用 |
37-39 |
|
4．2．1 DDC对CYP2E1的抑制作用 |
37-38 |
|
4．2．2 西咪替丁对CYP2E1的抑制作用 |
38-39 |
|
4．3 本章小结 |
39-40 |
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第五章 药物肝毒性的研究 |
40-48 |
|
5．1 水杨酸钠的肝细胞毒性 |
40-42 |
|
5．1．1 肝细胞活率 |
40-41 |
|
5．1．2 尿素合成量 |
41 |
|
5．1．3 大鼠白蛋白分泌量 |
41-42 |
|
5．2 甲氨喋呤的肝细胞毒性 |
42-46 |
|
5．2．1 肝细胞活率 |
43-44 |
|
5．2．2 尿素合成量 |
44-45 |
|
5．2．3 大鼠白蛋白分泌量 |
45-46 |
|
5．3 本章小结 |
46-48 |
|
第六章 肝细胞冷冻保存的研究 |
48-52 |
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6．1 冷冻保存后细胞形态变化 |
48-49 |
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6．2 冻存肝细胞的肝功能 |
49-50 |
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6．3 药物对冻存肝细胞的肝毒性 |
50 |
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6．4 本章小结 |
50-52 |
|
结论与展望 |
52-54 |
|
参考文献 |
54-63 |
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硕士就读期间成果 |
63-64 |
|
致谢 |
64 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.198665 |
