| 【中文题名】 | 荧光光度法二氢叶酸还原酶抑制剂筛选模型的建立和应用 |
| 【英文题名】 | |
| 【学科专业】 | 分析化学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2006-11-7 |
| 【中关键词】 | 二氢叶酸还原酶,荧光光度法,抑制剂,,, |
| 【英关键词】 | DHFR,Fluorophotometry,Inhibitors, |
| 【分类导航】 | 医药、卫生>药学>药理学>实验药理学>药物筛选和实验模型> |
| 【论文摘要】 | 二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase, DHFR, EC 1.5.1.3)是核酸代谢中关键的酶之一，是癌症药物治疗中的主要靶酶，近年来得到广泛的研究。二氢叶酸还原酶抑制剂能选择性的与二氢叶酸还原酶结合，抑制其催化还原活性，使二氢叶酸不能顺利转变为四氢叶酸，阻碍叶酸代谢，干扰DNA和蛋白质的合成，最终导致细胞死亡，所以二氢叶酸还原酶抑制剂具有抗癌、抗菌和抗疟的作用。近年来，有关二氢叶酸还原酶抑制剂的研究主要集中在新的抗癌类药物的合成及其定量构效关系的研究。因此有必要建立一种快速、准确、简单易行的方法对合成药物进行体外筛选。本文围绕荧光光度法二氢叶酸还原酶抑制剂的筛选体系的建立与应用，进行了如下的工作：
第一章综述了酶活力的测定方法，影响酶催化反应的因素，荧光分析方法在酶分析中的应用。
第二章通过对二氢叶酸还原酶催化反应的反应物二氢叶酸、NADPH和产物四氢叶酸、NADP荧光性质的研究，用从Sigma公司购置商品酶建立了用荧光光度法测定二氢叶酸还原酶活力的体系，并应用于抑制剂的筛选。用建立方法对一些已知的二氢叶酸还原酶抑制剂进行检测，所得结果与文献报道结果... |
| 【论文题纲】 |
|
摘要 |
3-4 |
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Abstract |
4-5 |
|
目录 |
5-8 |
|
第一章 酶分析方法的研究进展 |
8-25 |
|
1.1 酶分析简介 |
8-9 |
|
1.2 酶活力测定的常用方法 |
9-14 |
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1.2.1 比色法与紫外-可见分光光度法 |
9-10 |
|
1.2.2 荧光分析法 |
10-11 |
|
1.2.3 酶偶联测定法 |
11-12 |
|
1.2.4 离子选择电极法 |
12-13 |
|
1.2.5 其他方法 |
13-14 |
|
1.3 酶催化反应的影响因素 |
14-16 |
|
1.3.1 底物 |
14-15 |
|
1.3.2 pH |
15 |
|
1.3.3 温度 |
15 |
|
1.3.4 辅助因子 |
15-16 |
|
1.3.5 空白和对照 |
16 |
|
1.4 荧光分析方法在酶分析中的应用 |
16-20 |
|
1.4.1 酶构象的研究 |
16-19 |
|
1.4.2 酶抑制剂的筛选 |
19-20 |
|
1.5 本论文的研究内容 |
20-21 |
|
1.6 展望 |
21-22 |
|
参考文献 |
22-25 |
|
第二章 荧光光度法二氢叶酸还原酶抑制剂筛选模型的建立和应用 |
25-34 |
|
2.1 引言 |
25-26 |
|
2.2 实验部分 |
26-27 |
|
2.2.1 仪器与试剂 |
26 |
|
2.2.2 酶活力的测定方法 |
26-27 |
|
2.2.3 动力学常数的测定方法 |
27 |
|
2.2.4 抑制剂的筛选方法 |
27 |
|
2.3 结果与讨论 |
27-32 |
|
2.3.1 DHFA，THFA，NADPH的荧光性质 |
27-29 |
|
2.3.2 实验条件的选择 |
29-30 |
|
2.3.3 动力学常数的测定 |
30-31 |
|
2.3.4 抑制剂的抑制率和IC_(50)的测定 |
31-32 |
|
2.4 展望 |
32-33 |
|
参考文献 |
33-34 |
|
第三章 鸡肝二氢叶酸还原酶的提取与纯化 |
34-42 |
|
3.1 引言 |
34 |
|
3.2 实验部分 |
34-37 |
|
3.2.1 试剂 |
34-35 |
|
3.2.2 仪器 |
35 |
|
3.2.3 二氢叶酸还原酶的提取 |
35-37 |
|
3.2.4 蛋白浓度的测定 |
37 |
|
3.2.5 酶活力的测定方法 |
37 |
|
3.3 结果与讨论 |
37-41 |
|
3.3.1 实验条件的改进 |
37-38 |
|
3.3.2 蛋白浓度测定的标准曲线 |
38 |
|
3.3.3 酶提取液的荧光性质 |
38-39 |
|
3.3.4 酶活力测定的时间进程曲线 |
39-40 |
|
3.3.5 各步提取液的蛋白浓度及酶活力的测定结果 |
40 |
|
3.3.6 结论 |
40-41 |
|
参考文献 |
41-42 |
|
第四章 鸡肝二氢叶酸还原酶抑制筛选模型建立和应用 |
42-50 |
|
4.1 引言 |
42-43 |
|
4.2 实验部分 |
43-44 |
|
4.2.1 仪器与试剂 |
43 |
|
4.2.2 鸡肝二氢叶酸还原酶的提取 |
43 |
|
4.2.3 酶活力的测定 |
43-44 |
|
4.2.4 抑制率的测定 |
44 |
|
4.3 结果与讨论 |
44-49 |
|
4.3.1 实验条件的选择 |
44-46 |
|
4.3.2 抑制剂的抑制率和IC_(50)的测定 |
46-49 |
|
4.3.3 结论 |
49 |
|
参考文献 |
49-50 |
|
第五章 高锰酸钾氧化—光化学反应荧光法测定 |
50-59 |
|
奶粉和尿样中叶酸含量的研究 |
50-59 |
|
5.1 引言 |
50-51 |
|
5.2 试验部分 |
51-52 |
|
5.2.1 仪器与试剂 |
51 |
|
5.2.2 试验方法 |
51 |
|
5.2.3 样品处理 |
51-52 |
|
5.3 结果与讨论 |
52-59 |
|
5.3.1 叶酸的激发光谱和荧光光谱 |
52 |
|
5.3.2 荧光测量条件的优化 |
52-55 |
|
5.3.3 样品处理和测定 |
55-58 |
|
5.3.4 样品分析 |
58-59 |
|
参考文献 |
59-60 |
|
攻读硕士学位期间发表和待发表的学术论文 |
60-61 |
|
致谢 |
61 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.199082 |
