| 【中文题名】 | 抗HIV药物筛选和活性研究及抗癌反义药物机理初探 |
| 【英文题名】 | Screening and in Vitro Evaluating Anti-HIV-1 Activities of Antagonists of Chemokine Receptor CCR5 |
| 【学科专业】 | 生物技术与医药 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-8-15 |
| 【中关键词】 | HIV病毒,CCR5受体,治疗指数,GTPγS结合实验,钙内流实验,反义药物 |
| 【英关键词】 | HIV,CCR5receptor,therapeutic index,GTPγSbinding assay,calcium mobilezation assay,antisense,bcl-2 gene,apoptosis, |
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| 【论文摘要】 |
主要使用P24抗原含量测定的方法检测了CCR5受体拮抗剂TD0232的体外抗病毒活性。结果显示,TD0232可以高效和特异的抑制多种亚型(A,B,C,O亚型)的HIV-1病毒临床分离株对人PBMC的感染,并具有与目前唯一经FDA批准上市的HIV-1融合抑制剂T20相当的治疗指数。研究所用的病毒株源于美国、中国、喀麦隆等地,具有来源上的多样性,其中还包含1株多药耐药株。此外,研究也证实①TD0232的抗病毒活性具有CCR5受体嗜性病毒特异性,即仅对R5嗜性HIV-1有抑制活性;②TD0232的抗病毒活性会部分地受到人血清存在的影响,高浓度的人血清存在使药物的最高抑制活性不能达到100%,该结果同药物的高血浆蛋白结合的特性相符。总之,本研究结果证实了TD0232具有良好的的体外抗HIV活性,可以有效抑制多种亚型HIV-1对人PBMC的感染。
运用传统的抽滤式[35S]-GTPγS结合实验的方法,对60个小分子化合物进行以趋化因子受体CCR5为靶点的药物筛选。筛选未发现CCR5的激动剂,但发现33个具有较高活性的CCR5受体拮抗剂(其中IC50达到nM级的有25个,10nM级的4个,100nM级的... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
2-3 |
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Abstract |
3-8 |
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第一部分 抗HIV 药物的体外病毒学研究 |
8-32 |
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1 引言 |
8-18 |
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1.1 艾滋病与抗艾滋病药物现状 |
8-12 |
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1.1.1 HIV 病毒与艾滋病概述 |
8-10 |
|
1.1.2 艾滋病治疗药物现状 |
10-12 |
|
1.2 趋化因子受体与艾滋病 |
12-16 |
|
1.2.1 趋化因子和趋化因子受体 |
12-13 |
|
1.2.2 趋化因子受体与艾滋病 |
13-16 |
|
1.3 抗 HIV 药物开发中的非临床药效学研究 |
16-18 |
|
2 化合物TD0232 的体外抗病毒活性研究 |
18-31 |
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2.1 实验材料 |
18-19 |
|
2.2 实验方法 |
19-21 |
|
2.2.1 体外抗病毒实验(P24 抗原检测法) |
19-20 |
|
2.2.2 化合物的细胞毒性测定 |
20 |
|
2.2.3 HIV-1 对U87.CD4 细胞感染的测定 |
20-21 |
|
2.3 实验结果 |
21-31 |
|
2.3.1 TD0232 对HIV-1JR-FL 病毒株的抗病毒活性研究 |
21-25 |
|
2.3.1.1 TD0232 对HIV-1JR-FL 感染人PBMC 的抑制 |
21-23 |
|
2.3.1.2 药物对人PBMC 的细胞毒性研究 |
23-24 |
|
2.3.1.3 TD0232 抗HIV-1 JRFL 感染人PBMC 的治疗指数 |
24-25 |
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2.3.2 TD0232 对多种类型HIV 病毒株感染人PBMC 的抑制研究 |
25-28 |
|
2.3.3 TD0232 体外抗病毒活性的特异性研究 |
28-31 |
|
2.3.3.1 HIV 病毒株的受体嗜性鉴定 |
28-29 |
|
2.3.3.2 TD0232 对R5 受体嗜性病毒感染的特异性抑制 |
29-31 |
|
3 讨论 |
31-32 |
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第二部分 针对趋化因子受体CCR5 的药物筛选 |
32-52 |
|
1 引言 |
32-35 |
|
1.1 针对趋化因子受体的药物筛选技术 |
32-35 |
|
2 针对趋化因子受体 CCR5 的药物筛选实验 |
35-50 |
|
2.1 实验材料 |
35-36 |
|
2.2 实验方法 |
36-37 |
|
2.2.1 抽滤法-[35S]-GTPγS 结合实验 |
36 |
|
2.2.2 SPA-WGA 法-[35S]-GTPγS 结合实验 |
36-37 |
|
2.2.3 钙内流实验 |
37 |
|
2.2.4 数据处理 |
37 |
|
2.3 实验结果 |
37-50 |
|
2.3.1 药物的初筛 |
37-38 |
|
2.3.2 抽滤法-[35S]-GTPγS 结合实验法绘制化合物浓度-抑制曲线 |
38-44 |
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2.3.3 SPA-WGA 法-[35S]-GTPγS 结合实验绘制部分化合物浓度-抑制曲线 |
44-47 |
|
2.3.4 钙内流实验法绘制部分化合物浓度-抑制曲线 |
47-50 |
|
3 讨论 |
50-52 |
|
第三部分 抗癌反义药物的体外药效研究 |
52-86 |
|
1 引言 |
52-69 |
|
1.1 反义药物 |
52-60 |
|
1.1.1 反义药物概述 |
52-55 |
|
1.1.2 硫代寡核苷酸类反义药物的药理、代谢、毒理特性 |
55-57 |
|
1.1.3 反义药物开发现状 |
57-60 |
|
1.2 Bcl-2 蛋白与癌症 |
60-63 |
|
1.2.1 Bcl-2、线粒体与细胞死亡 |
60-62 |
|
1.2.2 Bcl-2 与癌症 |
62-63 |
|
1.3 以Bcl-2 为靶点的反义药物 |
63-66 |
|
1.4 Bcl-2 为靶点的反义药物的体外药效研究方法 |
66-69 |
|
1.4.1 反义药物的圆二色光谱分析 |
66 |
|
1.4.2 反义药物对肿瘤细胞中 Bcl-2 表达的影响 |
66 |
|
1.4.3 反义药物诱导的肿瘤细胞凋亡的研究 |
66-68 |
|
1.4.4 反义药物对肿瘤细胞的集落生成抑制研究 |
68-69 |
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2 反义药物 KS0604 的体外药效学实验 |
69-84 |
|
2.1 实验材料 |
69-72 |
|
2.2 实验方法 |
72-77 |
|
2.2.1 KS0604 的圆二色光谱学实验 |
72 |
|
2.2.2 Bcl-2 基因的反转录PCR 实验 |
72-74 |
|
2.2.3 Bcl-2 蛋白的免疫印记实验(western blot) |
74-75 |
|
2.2.4 DAPI 染色实验 |
75-76 |
|
2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡实验 |
76 |
|
2.2.6 平板集落生成实验 |
76-77 |
|
2.3 实验结果 |
77-84 |
|
2.3.1 反义药物 KS0604 的光谱学性质研究 |
77-78 |
|
2.3.2 反义药物 KS0604 诱导靶基因Bcl-2 表达下调的研究 |
78-79 |
|
2.3.3 KS0604 诱导肿瘤细胞凋亡的研究 |
79-81 |
|
2.3.4 KS0604 导致的肿瘤细胞集落生成抑制 |
81-84 |
|
3 讨论 |
84-86 |
|
全文结论 |
86-87 |
|
参考文献 |
87-93 |
|
附录 |
93-94 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.199730 |
