| 【中文题名】 | 低免疫原性葡激酶的构建及功能分析 |
| 【英文题名】 | Design and Functional Analysis of a Novel Staphylokinase Variant with Reduced Immunogenicity |
| 【学科专业】 | 遗传学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-8-24 |
| 【中关键词】 | 葡激酶,突变体,抗原表位,溶栓,免疫原性, |
| 【英关键词】 | staphylokinase,mutant,epitope,thrombolysis,immunogenicity, |
| 【分类导航】 | 医药、卫生>药学>药物基础科学>>> |
| 【论文摘要】 |
天然葡激酶(staphylokinase，SAK)是溶原性金黄色葡萄球菌合成的一种单链蛋白，由136个氨基酸组成，其中包括45个带电氨基酸残基不含半胱氨酸及二硫键，分子量15.5kDa。研究发现SAK可以选择性的作用于纤维蛋白原。SAK具有纤维蛋白特异性高，对血小板富集型血栓作用强等优点。与同期上市的溶栓药物相比具有溶栓效果好，专一性强，副作用小，价格便宜等优点。我室研制的重组葡激酶(rSAK)已经完成二期临床实验，对急性心梗的治疗结果表明，rSAK的再通率显著高于r-tPA，显示出良好的临床应用前景。但是SAK作为一种细菌源性蛋白，在用药后两周产生大量中和性抗体，影响其重复使用。在一定程度上限制了其临床应用范围。
对SAK分子进行修饰，改造其抗原表位，是获得新型低免疫原性溶栓药物的重要方法之一。本研究利用Biosun软件，对我室的野生型SAK(wild type staphylokinase，wtSAK)的抗原表位进行了预测，并结合SAK晶体结构和对其抗原表位研究的报道，选择了多个位点的氨基酸进行了缺失和突变，构建了10个SAK的突变体。结合SAK突变体活性和表达情况对其进行了筛选。从中选... |
| 【论文题纲】 |
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英文缩略词表 |
5-7 |
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中文摘要 |
7-10 |
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英文摘要 |
10-13 |
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前言 |
13-16 |
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第一部分 SAK突变体的构建，表达，纯化及活性分析 |
16-38 |
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1 材料与方法 |
16-26 |
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2 结果 |
26-36 |
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3 讨论 |
36-38 |
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第二部分 重组蛋白SAK2制备工艺的研究，抗体制备及检测 |
38-50 |
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1 材料与方法 |
38-44 |
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2 实验结果 |
44-48 |
|
3 讨论 |
48-50 |
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第三部分 WTSAK与 SAK2在猕猴体内产生抗体的检测 |
50-61 |
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1 材料与方法 |
50-53 |
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2 实验结果 |
53-59 |
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3 讨论 |
59-61 |
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总结 |
61-62 |
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参考文献 |
62-66 |
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文献综述 |
66-73 |
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致谢 |
73-74 |
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附:发表文章 |
74-87 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.199788 |
