| 【中文题名】 | 多酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的筛选及初步功能研究 |
| 【英文题名】 | The Screening and Primary Functional Study of Histone Deacetylase Inhibitors from Polyoxometallates |
| 【学科专业】 | 细胞生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-10-10 |
| 【中关键词】 | 组蛋白去乙酰化酶抑制剂,杂多酸,p21~WAF1CIP1）,组蛋白去乙酰化酶,, |
| 【英关键词】 | Histone deacetylase inhibitors,Polyoxometalates,p21~WAF1/CIP1）,histone deacetylases, |
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| 【论文摘要】 |
基因的正常表达与调控是机体正常生长发育所必需的。组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases, HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDACs)可以通过调节组蛋白或转录因子的乙酰化状态来调节基因的活化或沉默。HATs引发染色质结构的松散,激活转录;而HDACs则可导致染色质集缩,并抑制特定靶基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)能抑制HDACs的活性,并通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长停滞、分化或凋亡,具有明显的抗肿瘤活性。
p21~WAF1/CIP1)基因编码的蛋白是一种细胞周期依赖性蛋白激酶因子(CDKI),在细胞周期调控、细胞凋亡和细胞分化中都起着重要的作用。研究表明,p21~WAF1/CIP1)基因作为一种重要的抑癌基因,其表达量的多少与肿瘤密切相关。p21~WAF1/CIP1)基因的低表达,可造成异常细胞增生,有益于肿瘤的形成。在乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中,p21~WAF1/CIP1)基因的表达明显降低。最近的研究表明,... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
4-5 |
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英文摘要 |
5-9 |
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引言 |
9-10 |
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一、本论文的研究背景和立题依据 |
9 |
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二、本论文的研究内容和意义 |
9-10 |
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第一章 文献综述 |
10-25 |
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一、组蛋白的乙酰化和去乙酰化与基因表达调控 |
10-13 |
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（一） 核小体结构和转录 |
10 |
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（二） 组蛋白修饰酶类重塑复合物 |
10-11 |
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（三） HAT 和 HDAC |
11 |
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（四） HDAC 和 HAT 在癌症发病机制的作用及其对癌症治疗的启迪 |
11-13 |
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二、组蛋白去乙酰化酶 |
13-18 |
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（一） 组蛋白去乙酰化酶的分类 |
13 |
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（二） 组蛋白去乙酰化酶的生物学功能 |
13-18 |
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1. 组蛋白去乙酰化酶（HDAC）和转录辅抑制子 |
13-15 |
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2. 组蛋白去乙酰化酶相关蛋白 |
15-16 |
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3. Sirtuins 蛋白复合物及其生物学功能 |
16-17 |
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4. 组蛋白去乙酰化酶与癌症 |
17-18 |
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三、组蛋白去乙酰化酶抑制剂的作用机制及分类 |
18-20 |
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（一） 组蛋白去乙酰化酶抑制剂的作用机制 |
19 |
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（二） 组蛋白去乙酰化酶抑制剂的分类 |
19-20 |
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四、p21 的研究进展 |
20-22 |
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（一） p21~(WAF1/CIP1)的克隆 |
20 |
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（二） p21 的作用 |
20-21 |
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（三） p21 的作用机制 |
21-22 |
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五、杂多酸抗肿瘤的研究概况 |
22-25 |
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（一） 作为药物,杂多酸的优势 |
22-23 |
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（二） 杂多酸抗肿瘤的研究概况 |
23-25 |
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第二章 实验材料和方法 |
25-32 |
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一、实验材料 |
25 |
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（一） 细胞及其培养试剂 |
25 |
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（二） 杂多酸 |
25 |
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（三） 质粒 |
25 |
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（四） 实验设备及仪器 |
25 |
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二、实验方法 |
25-32 |
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（一） 有效杂多酸的筛选 |
25-26 |
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（二） 质粒的大量制备 |
26-27 |
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（三） 哺乳动物细胞培养 |
27 |
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（四） 哺乳动物细胞转染（磷酸钙瞬时转染） |
27-28 |
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（五） 相对荧光素酶活性（RLA）测定 |
28 |
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（六） 哺乳动物细胞总RNA 的提取 |
28-29 |
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（七） 逆转录PCR反应 |
29-30 |
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（八） Real Time RT-PCR 反应 |
30-31 |
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（九） MTT快速比色法 |
31-32 |
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第三章 结果与分析 |
32-40 |
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一、有效杂多酸的筛选 |
32-36 |
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（一） 组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA 的最佳处理浓度 |
32-33 |
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（二） 96 孔板上所加细胞裂解液体积的确定 |
33 |
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（三） 有效杂多酸的初步筛选 |
33-36 |
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二、针对有效杂多酸的初步的功能研究 |
36-40 |
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（一） MTT实验 |
36-38 |
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（二） HDAC 与杂多酸 |
38-39 |
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1. 杂多酸可以逆转HDAC对p21~(WAF1/CIP1)报告基因的抑制作用 |
38 |
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2. Real Time RT-PCR 反应 |
38-39 |
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（三） 杂多酸对内源p21~(WAF1/CIP1)m RNA的表达水平的影响 |
39-40 |
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第四章 讨论 |
40-43 |
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一、杂多酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的筛选 |
40-41 |
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二、杂多酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的初步的功能研究 |
41-43 |
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（一） 杂多酸能明显抑制部分肿瘤细胞的生长，并且呈浓度依赖性 |
41 |
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（二） PA-320 具有类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的活性 |
41-43 |
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第五章 结论 |
43-44 |
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参考文献 |
44-51 |
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致谢 |
51-52 |
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在学期间公开发表论文及著作况 |
52 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.199867 |
