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大熊猫犬冠状病毒动物感染试验及其荧光检测方法的建立

作者：逄博 Publish: 2006-1-4 Hits:-

【中文题名】

大熊猫犬冠状病毒动物感染试验及其荧光检测方法的建立

【英文题名】

Animal Infection Assay and Setting-up of Fluorescence Antibody Detection to Canine Coronavirus from Giant Pandas

【学科专业】

预防兽医学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2006-1-4

【中关键词】

大熊猫,犬冠状病毒,动物感染试验,荧光抗体,,

【英关键词】

Giant panda,Canine coronavirus,Animal infection assay,Fluorescence antibody,

【分类导航】

农业科学>畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂>动物医学（兽医学）>各种家畜、家禽、野生动物的疾>野生动物疾病>观赏动物

【论文摘要】

大熊猫是世界的珍稀动物,1984年世界野生动物基金会(WWF)宣布大熊猫为世界10种濒危物种之一。由于人为因素造成大熊猫生存环境的不断恶化及其自身生存能力的限制,大熊猫的生存正时刻受到严重的威胁。患病死亡是大熊猫数量减少、种群濒危的重要原因之一,其中病毒性疾病对大熊猫的危害较大。犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCV)是引起犬急性胃肠炎的重要病原之一,既可单独致病,又可与多种病原混合感染,呈急性胃肠炎综合征。临床上表现为剧烈的呕吐、腹泻,是当前危害养犬业较大的疫病之一。1997年5月,重庆某动物园3只大熊猫发病,经强心、补液和抗菌消炎等治疗措施,收效甚微,于6月22日两只26岁的大熊猫相继死亡。胡桂学等人利用犬肾传代细胞从送检的死亡大熊猫肝、脾等病料中分离获得了一株病毒。通过普通病毒学和分子生物学的鉴定和分析比较,证明该株病毒为犬冠状病毒(CCV),命名为CCV DXMV。为了阐明CCV DXMV在大熊猫死亡中所起的作用,进行了如下实验。将初生幼犬分成三组,人工感染CCV DXMV为攻毒组(A组),感染CCV标准毒株CCV NL-18为阳性组(B组),另设阴性对照组(C组)。...

【论文题纲】

中文摘要	7-9
Abstract	9-11
前言	11-23
正文	23-55
1 材料	23
1．1 病毒与血清	23
1．2 试验动物	23
1．3 主要试剂	23
1．4 主要仪器	23
2 方法	23-29
2．1 动物感染试验	23-24
2．1．1 试验动物分组及接毒剂量	23-24
2．1．2 临床症状及病理剖检观察	24
2．2 幼犬的免疫	24-25
2．2．1 抗原的制备	24
2．2．2 免疫部位与免疫程序	24-25
2．2．3 血清的提取	25
2．3 荧光抗体的制备	25-28
2．3．1 饱和(NH_4)_2SO_4法提取免疫球蛋白	25
2．3．2 FITC标记抗体	25-26
2．3．3 荧光抗体的鉴定	26
2．3．4 标记抗体的纯化	26-28
2．4 CCV DXMV荧光检测方法的建立-直接荧光抗体法	28-29
2．4．1 判定标准	28
2．4．2 染色性能的鉴定	28-29
2．4．3 染色方法	29
2．5 组织中病毒抗原的检测	29
3 结果	29-49
3．1 体温变化	29-32
3．1．1 幼犬体温测定结果	30
3．1．2 体温变化曲线	30-31
3．1．3 体温变化值	31
3．1．4 体温变化情况	31-32
3．2 临床症状和病理剖检变化	32
3．2．1 临床症状的观察	32
3．2．2 病理剖检变化	32
3．3 病理组织变化	32-39
3．3．1 攻毒组 A组	32-36
3．3．2 阳性对照B组	36-39
3．4 幼犬的免疫与免疫球蛋白的提取	39
3．5 荧光抗体的制备	39-42
3．5．1 FITC的称量和标记	39
3．5．2 荧光抗体的鉴定	39-40
3．5．3 标记抗体的纯化	40-42
3．6 CCV DXMV荧光检测方法的建立	42
3．6．1 荧光抗体效价的测定	42
3．6．2 荧光抗体的特异性试验	42
3．7 荧光抗体法检测组织中的病毒抗原	42-49
3．7．1 攻毒组	42-45
3．7．2 阳性组	45-48
3．7．3 阴性对照组C	48-49
4 讨论	49-54
4．1 关于实验动物模型的建立	49
4．2 关于幼犬的体温变化	49-50
4．3 关于石蜡切片的制作	50
4．4 关于病毒的复制及复制部位	50-51
4．5 关于非特异性荧光的消除	51
4．6 关于缓冲液的选择	51-52
4．7 荧光抗体浓度的选择	52
4．8 关于建立的荧光抗检测方法的评价	52
4．9 关于CCV DXMV和CCV NL-18的亲缘关系	52-53
4．10 关于石蜡切片与荧光抗体染片的关系	53
4．11 关于大熊猫犬冠状病毒的致病性	53
4．12 关于大熊猫的保护	53-54
5 结论	54-55
参考文献	55-59
致谢	59

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.163656



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