| 【中文题名】 | 小熊猫成纤维细胞系的建立、冷冻保存及异种重构胚构建 |
| 【英文题名】 | Fibroblast Cell Line Establishment and Cryopreservation and Interspecies Embryos Reconstruction in Red Panda (Ailurus Fulgens) |
| 【学科专业】 | 基础兽医学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-8-31 |
| 【中关键词】 | 小熊猫成纤维细胞系,冷冻保存,异种核移植,,, |
| 【英关键词】 | the cell line of red panda ear fibroblast,cryopreservation,interspecies somatic cell nuclear transfer, |
| 【分类导航】 | 生物科学>生物工程学(生物技术)>细胞工程>>> |
| 【论文摘要】 |
小熊猫是一种濒危野生动物，其进化史在高等肉食类类熊科动物的进化中扮演着重要的角色，其在动物分类学、系统进化学及生态学等领域都具有十分重要的研究价值。
为了在细胞水平上长期保存小熊猫这一珍稀物种，同时也为构建小熊猫异种克隆胚提供供体细胞，本研究采集一5岁雌性小熊猫耳组织，以低糖DMEM为基础液，添加20％FBS作为原代细胞培养液，添加10％FBS作为传代细胞培养液，应用组织块培养法培养小熊猫成纤维细胞到10代；同时在基础培养液中添加20％FBS、8％DMSO作为冷冻保护剂，以4℃平衡30min、-80℃冰箱过夜、最后投入液氮作为冷冻程序，对小熊猫成纤维细胞进行了冷冻保存。本研究成功的建立了小熊猫成纤维细胞系，观察结果表明细胞形态与生长发育情况良好；冷冻保存的第三代细胞解冻后再培养，其生长曲线符合贴壁细胞的生长规律，培养至96h时，细胞贴壁率达到100％。
为获得构建小熊猫异种重构胚所需的卵母细胞，本研究采用超数排卵技术对日本大耳兔进行超数排卵，并比较了不同超数排卵方案的效果。结果表明，四种不同剂量组合的“eCG肌肉注射+hCG静脉注射”的兔超数排卵方案的平均获卵数差异显著，而获得的可用... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
5-6 |
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Abstract |
6-9 |
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缩略词表 |
9-10 |
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文献综述 哺乳动物异种核移植研究进展 |
10-17 |
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1 哺乳动物异种克隆研究的理论基础和研究现状 |
10-14 |
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1.1 哺乳动物异种克隆的理论基础 |
10 |
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1.2 异种克隆技术环节的研究现状 |
10-13 |
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1.2.1 体细胞处理 |
10-11 |
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1.2.2 受体卵母细胞的处理 |
11-12 |
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1.2.3 构建重构胚的方法 |
12 |
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1.2.4 卵母细胞去核的方法 |
12 |
|
1.2.5 重构胚的融合和激活 |
12-13 |
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1.2.6 重构胚的体外培养及其发育 |
13 |
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1.3 异种克隆研究进展 |
13-14 |
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2 异种克隆的意义和应用前景 |
14-15 |
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2.1 拯救濒危动物 |
14-15 |
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2.2 分离克隆人类胚胎干细胞 |
15 |
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2.3 有助于探讨一些生物学基础问题 |
15 |
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3 异种克隆存在的相关问题及可能解决方法 |
15-17 |
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3.1 重构胚代孕受体的选择 |
15-16 |
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3.2 供体和受体的选择 |
16 |
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3.3 克隆效率问题 |
16-17 |
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引言 |
17-19 |
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1 材料与方法 |
19-26 |
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1.1 试验材料 |
19 |
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1.1.1 小熊猫耳部组织 |
19 |
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1.1.2 兔卵母细胞 |
19 |
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1.2 仪器与试剂 |
19-21 |
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1.2.1 主要试剂 |
19-20 |
|
1.2.2 主要仪器 |
20 |
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1.2.3 主要试剂的配制 |
20-21 |
|
1.3 方法 |
21-23 |
|
1.3.1 小熊猫成纤维细胞的培养 |
21 |
|
1.3.2 小熊猫成纤维细胞的冷冻保存和复苏 |
21 |
|
1.3.3 兔的超数排卵与成熟卵母细胞回收 |
21-22 |
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1.3.4 体细胞核移植——小熊猫-兔异种重构胚的构建 |
22-23 |
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1.3.5 重构胚的融合和激活 |
23 |
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1.3.6 重构胚的体外培养 |
23 |
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1.3.7 兔卵母细胞的孤雌激活 |
23 |
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1.4 实验设计 |
23-25 |
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1.5 统计分析 |
25-26 |
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2 结果 |
26-32 |
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2.1 小熊猫耳成纤维原代培养细胞生长发育情况 |
26 |
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2.2 小熊猫耳成纤维传代培养细胞生长发育情况 |
26 |
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2.3 小熊猫耳成纤维冷冻细胞复苏后生长发育情况 |
26-28 |
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2.4 小熊猫成纤维细胞生长曲线 |
28 |
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2.5 不同超数排卵方案对兔超排效果的比较 |
28-30 |
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2.6 小熊猫-兔异种重构胚的发育 |
30-32 |
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2.6.1 小熊猫-兔异种重构胚发育过程 |
30-31 |
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2.6.2 小熊猫-兔异种重构胚的发育率 |
31-32 |
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3 讨论 |
32-37 |
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3.1 成纤维细胞体外培养 |
32 |
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3.2 成纤维细胞的冷冻保存 |
32-33 |
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3.3 家兔的超数排卵方案 |
33 |
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3.4 小熊猫-兔异种重构胚的构建及发育 |
33-37 |
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3.4.1 小熊猫-兔异种重构胚的构建 |
33-34 |
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3.4.2 小熊猫-兔异种重构胚的发育率 |
34 |
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3.4.3 供体细胞周期对异种核移植的影响 |
34-35 |
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3.4.4 电融合、激活对重构胚发育的的影响 |
35 |
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3.4.5 重构胚的体外培养体系 |
35-37 |
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4 总结 |
37-38 |
|
参考文献 |
38-46 |
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致谢 |
46-48 |
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个人简介 |
48 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.163709 |
