| 【中文题名】 | 柚类柑橘衰退病毒（CTV）强、弱毒分离株的分子鉴定 |
| 【英文题名】 | Molecular Identification of Mild and Severe Isolates of Citrus Tristeza Virus from Pummelos |
| 【学科专业】 | 植物病理学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2005-9-5 |
| 【中关键词】 | 柑橘衰退病毒（CTV）,限制性片段长度多态性（RFLP）,双向RT-PCR（BD-PCR）,序列分析,分子鉴定,弱毒株交叉保护（MSCP） |
| 【英关键词】 | Citrus tristeza virus （CTV）,Restriction fragment length polymorphism （RFLP）,Bi-Directional reverse transcription polymerase chain reaction （BD-PCR）,single strain conformation polymorphism （SSCP）,DNA Sequencing, |
| 【分类导航】 | 农业科学>炭疽病>植物保护>病虫害及其防治>园艺作物病虫害及其防治>果树病虫害 |
| 【论文摘要】 | 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)是线形病毒科线形病毒属的一种,严重威胁着世界的柑橘生产。在我国,CTV及其强力传媒褐色橘蚜(Toxoptera citricida Kirkaldy)广泛分布。目前,我国柚类栽培面积和产量均居世界首位,经济效益显著,发展前景广阔。但由于柚类优良品种及其砧木多对CTV敏感,随着柚类栽培面积的不断扩大,茎陷点型衰退病的危害呈日益严重趋势。依据国外经验,在CTV强毒系及橘蚜并存的地区,应用弱毒系交叉保护(MSCP)是保证感病品种生产的最有效措施。因此,了解CTV在我国柚类上的发生及株系分布情况,筛选和鉴定有代表性的CTV强、弱毒分离株,尽快为弱毒系交叉保护的应用奠定基础,对保证我国柚类产业的健康发展具有十分重要的意义。
本研究应用直接组织印迹免疫(DTBIA)对不同地区不同品种的450个柚类样品进行了CTV检测;在此基础上,应用RT-PCR、RFLP、BD-PCR对126个柚类CTV分离株进行了初步的鉴定分析;对6个代表性的分离株做了指示植物鉴定和单蚜传毒分离纯化,并对所获得的29个单蚜分离株做了RFLP、BD-PCR、SSCP分析;对6... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
5-6 |
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Abstract |
6-8 |
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缩略符号表 |
8-11 |
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第一章 绪论 |
11-20 |
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1.1 研究背景、目的和意义 |
11-12 |
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1.1.1 柚类重要性 |
11 |
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1.1.2 柑橘衰退病毒(CTV)的分布及危害 |
11-12 |
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1.1.3 CTV防治策略与弱毒系交叉保护(MSCP) |
12 |
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1.2 国内外研究现状 |
12-19 |
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1.2.1 CTV分类学地位 |
12-13 |
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1.2.2 CTV理化特性 |
13 |
|
1.2.3 CTV生物学特性 |
13-14 |
|
1.2.4 CTV分子生物学特性 |
14-15 |
|
1.2.5 CTV的株系鉴定 |
15-19 |
|
1.3 小结 |
19-20 |
|
第二章 材料与方法 |
20-25 |
|
2.1 供试材料 |
20-21 |
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2.1.1 样品采集 |
20 |
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2.1.2 供试昆虫 |
20 |
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2.1.3 供试苗木 |
20 |
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2.1.4 供试试剂 |
20-21 |
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2.1.5 实验仪器 |
21 |
|
2.2 试验方法 |
21-25 |
|
2.2.1 直接组织印迹免疫(DTBIA)检测 |
21 |
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2.2.2 毒源保存 |
21-22 |
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2.2.3 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 |
22 |
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2.2.4 限制性片段长度多态性(RFLP)分析 |
22 |
|
2.2.5 双向逆转录-聚合酶链式反应(BD-PCR)分析 |
22-23 |
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2.2.6 单蚜传毒纯化 |
23-24 |
|
2.2.7 序列测定与分析 |
24 |
|
2.2.8 指示植物鉴定 |
24-25 |
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第三章 结果与分析 |
25-38 |
|
3.1 直接组织印迹免疫(DTBIA)检测 |
25-26 |
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3.2 毒源保存 |
26-27 |
|
3.3 p25／RT-PCR检测 |
27 |
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3.4 CTV柚分离株的p25／Hinf1 RFLP分析 |
27-29 |
|
3.5 CTV柚分离株的p23／BD-PCR分析 |
29-31 |
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3.6 单蚜传毒纯化 |
31-33 |
|
3.6.1 单蚜传毒结果 |
31 |
|
3.6.2 纯化结果分析 |
31-33 |
|
3.7 序列测定及分析 |
33-37 |
|
3.7.1 RT-PCR反转录及纯化结果 |
33 |
|
3.7.2 p25序列测定结果及分析 |
33-34 |
|
3.7.3 p23序列测定结果及分析 |
34-37 |
|
3.8 指示植物鉴定结果 |
37-38 |
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第四章 结论与讨论 |
38-42 |
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4.1 结论 |
38 |
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4.2 讨论 |
38-42 |
|
参考文献 |
42-49 |
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附录 |
49-55 |
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1.常用缓冲液及储备液 |
49-50 |
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2.p25序列测定结果 |
50-52 |
|
3.p23序列测定结果 |
52-55 |
|
致谢 |
55-56 |
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作者简历 |
56 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.151856 |
