| 【中文题名】 | 湖南柑橘黄龙病检测及DNA片段克隆 |
| 【英文题名】 | Detection of Citrus Huanglongbing Pathogen in Hunan Province and Cloning |
| 【学科专业】 | 果树学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2006-11-1 |
| 【中关键词】 | 湖南,柑橘黄龙病,PCR检测,克隆,IR检测, |
| 【英关键词】 | Hunan Province,Citrus Huanglongbing,PCR detection,Clone,IR detection, |
| 【分类导航】 | 农业科学>炭疽病>植物保护>病虫害及其防治>园艺作物病虫害及其防治>果树病虫害 |
| 【论文摘要】 | 柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter)引起的一种柑橘毁灭性病害，危害轻者可引起树势衰退，产量下降，品质变劣；重者可引起成片柑橘树死亡，对柑橘生产构成严重障碍。湖南与广东、广西接壤，是柑橘黄龙病偶发区。近年来，随全球气温变暖，木虱活动范围扩大，柑橘黄龙病存在潜在威胁，并且在少数柑橘产区已出现柑橘黄龙病的疑似症状，有的甚至出现大片橘树枯死和毁园的现象。为进一步了解柑桔黄龙病的发生情况及传播途径，以便及时采取有效控制措施，杜绝病源传播。本研究于2005年4月至2006年3月对全省柑橘主产区的48份材料进行了PCR检测和IR(Idione Reactio)快速检测，同时进行了PCR片段克隆、测序。
研究结果如下：
1．在前人研究的基础上，对柑橘黄龙病PCR检测技术进行改进，建立了准确、快速、灵敏、稳定、安全的柑桔黄龙病菌PCR检测体系。以夏梢的韧皮部为材料，提取的DNA较稳定，检出率高，假阳性少；筛选的引物对OL1／OL2，特异性强，稳定性好，灵敏度高。
2．自制的PCR产物纯化回收简易过滤... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
4-5 |
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Abstract |
5-9 |
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1. 前言 |
9-19 |
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1.1 问题提出 |
9 |
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1.2 柑橘黄龙病研究进展 |
9-18 |
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1.2.1 柑橘黄龙病分布、发生情况 |
9-10 |
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1.2.2 柑橘黄龙病的症状 |
10-11 |
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1.2.3 柑橘黄龙病传播途径 |
11 |
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1.2.4 柑橘黄龙病病菌 |
11-14 |
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1.2.5 柑橘黄龙病检测方法 |
14-18 |
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1.3 本研究目的与主要内容 |
18-19 |
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2 材料与方法 |
19-31 |
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2.1 样品采集及相关情况调查 |
19-21 |
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2.1.1 采样地点 |
19 |
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2.1.2 采样方法 |
19 |
|
2.1.3 采样地区相关情况调查 |
19-21 |
|
2.2 主要仪器与试剂 |
21-22 |
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2.2.1 主要仪器 |
21 |
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2.2.2 主要试剂 |
21-22 |
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2.3 实验方法 |
22-31 |
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2.3.1 PCR检测 |
22-25 |
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2.3.2 PCR片段克隆 |
25-29 |
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2.3.3 IR快速检测 |
29-31 |
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3. 结果与分析 |
31-45 |
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3.1 柑桔黄龙病 PCR检测体系建立 |
31-34 |
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3.1.1 不同材料总DNA的提取 |
31 |
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3.1.2 引物筛选 |
31-33 |
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3.1.3 不同退火温度比较 |
33-34 |
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3.2 PCR检测结果 |
34-37 |
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3.2.1 供试样品柑橘黄龙病 PCR检测结果 |
34-36 |
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3.2.2 不同叶片黄化类型 PCR检测结果 |
36 |
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3.2.3 同一柑橘园不同品种 PCR检测结果 |
36-37 |
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3.3 柑橘黄龙病 PCR片段克隆与序列分析 |
37-41 |
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3.3.1 PCR产物纯化 |
37 |
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3.3.2 阳性转化子的进一步筛选与鉴定 |
37-38 |
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3.3.3 质粒提取 |
38 |
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3.3.4 测序结果分析 |
38-41 |
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3.4 IR快速检测 |
41-43 |
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3.4.1 叶片淀粉含量测定 |
41 |
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3.4.2 IR快速检测结果与分析 |
41 |
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3.4.3 黄龙病 IR检测结果 |
41-43 |
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3.5 基于本次研究结果对柑橘黄龙病发生情况分析 |
43-45 |
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4. 讨论 |
45-49 |
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4.1 适于柑橘黄龙病 PCR检测体系的建立 |
45-46 |
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4.2 PCR特异产物回收纯化方法的改进 |
46-47 |
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4.3 应用 IR法快速检测柑桔黄龙病的可行性 |
47 |
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4.4 控制柑桔黄龙病蔓延的建议 |
47-49 |
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5. 结论与展望 |
49-51 |
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5.1 结论 |
49 |
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5.2 展望 |
49-51 |
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参考文献 |
51-62 |
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缩写词及英汉对照 |
62-63 |
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致谢 |
63-64 |
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个人简历 |
64 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.151967 |
