| 【中文题名】 | 香蕉穿孔线虫（Radopholus similis）rDNA-ITS序列分析及其对生物杀线虫剂敏感性测定 |
| 【英文题名】 | Sequence Analysis of rDNA-ITS of the Burrowing Nematode (Radopholus Similis) and Sensitivity Bioassay of Bio-nematicides on the Nematode |
| 【学科专业】 | 植物病理学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-9-18 |
| 【中关键词】 | 香蕉穿孔线虫,繁殖率,克隆,测序,药剂防治, |
| 【英关键词】 | Radopholus similis,Reproduce fitness,Cloning,Sequencing,Insecticide Control, |
| 【分类导航】 | 农业科学>植物保护>病虫害及其防治>园艺作物病虫害及其防治>果树病虫害>多年生草本果类病虫害 |
| 【论文摘要】 |
本文对来自于不同地区的7个香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)群体进行了分子鉴定，对其ITS区域进行序列测定和分析，并采用6个药剂对该线虫进行了的室内毒力测定。
通过研究香蕉穿孔线虫在胡萝卜片上的离体培养，阐述了培养时间、接种量以及单头雌虫接种对其在胡萝卜片上繁殖率的影响。结果表明，接种了香蕉穿孔线虫的胡萝卜片60天后进行分离，可以获得最大的繁殖量，每个胡萝卜片上接种量为25头时线虫的繁殖量最大，另外证明了香蕉穿孔线虫可能进行孤雌生殖。
利用Ferris et al.(1993)通用引物对7个不同群体来源的香蕉穿孔线虫的ITS进行PCR扩增，得到长706bp的目的片段。对这些ITS片段序列进行克隆及测序，然后与已知的香蕉穿孔线虫ITS片段序列进行序列比对分析及同源性比较分析，结果表明它们的同源率为99.09％。
根据香蕉穿孔线虫rDNA-ITS区的序列特征，设计了一对特异性引物RsF1／RsR1，特异扩增片段为271bp；用线虫通用引物D3A／D3B作内标，设计出一步双重PCR技术用于香蕉穿孔线虫种群的特异性分子检测，该检测具有较好的特异性，且耗时较短、操作简... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
6-7 |
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Abstract |
7-11 |
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第一章 绪论 |
11-27 |
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1.1 香蕉穿孔线虫简介 |
11-17 |
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1.1.1 香蕉穿孔线虫的分类地位及形态特征 |
11-12 |
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1.1.2 香蕉穿孔线虫的发生历史、分布和经济重要性 |
12-14 |
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1.1.3 香蕉穿孔线虫的寄主范围 |
14 |
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1.1.4 香蕉穿孔线虫的危害症状 |
14-15 |
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1.1.5 香蕉穿孔线虫的生物学特性 |
15-17 |
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1.1.6 香蕉穿孔线虫的传播途径 |
17 |
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1.2 香蕉穿孔线虫的离体培养及繁殖力研究 |
17-18 |
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1.3 香蕉穿孔线虫的预防、根除及防治研究 |
18-19 |
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1.3.1 检疫 |
18 |
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1.3.2 农业防治 |
18 |
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1.3.3 选用抗病品种 |
18 |
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1.3.4 化学防治 |
18-19 |
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1.3.5 物理防治 |
19 |
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1.4 香蕉穿孔线虫的分类鉴定方法 |
19-26 |
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1.4.1 形态学特征分类鉴定 |
19-20 |
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1.4.2 分子鉴定 |
20-25 |
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1.4.3 种特异引物的应用 |
25-26 |
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1.5 本研究的目的和意义 |
26-27 |
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第二章 香蕉穿孔线虫的离体培养及其繁殖力研究 |
27-32 |
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2.1 香蕉穿孔线虫的离体培养 |
27-29 |
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2.1.1 实验材料 |
27 |
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2.1.2 胡萝卜圆片的培养 |
27-28 |
|
2.1.3 线虫接种与培养 |
28 |
|
2.1.4 线虫的分离与计数 |
28-29 |
|
2.2 香蕉穿孔线虫在胡萝卜片上的繁殖力研究 |
29-31 |
|
2.2.1 实验材料 |
29 |
|
2.2.2 香蕉穿孔线虫在胡片上的繁殖力实验 |
29-31 |
|
2.3 小结 |
31-32 |
|
第三章 香蕉穿孔线虫的rDNA-ITS序列分析及特异引物设计 |
32-44 |
|
3.1 材料与方法 |
32-36 |
|
3.1.1 实验材料 |
32 |
|
3.1.2 香蕉穿孔线虫的纯化培养与分离 |
32 |
|
3.1.3 线虫DNA的提取 |
32 |
|
3.1.4 线虫ITS序列的测定 |
32-34 |
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3.1.5 ITS序列的测定及数据分析 |
34-35 |
|
3.1.6 特异性引物的设计与检测 |
35-36 |
|
3.2 结果与分析 |
36-43 |
|
3.2.1 PCR扩增 |
36 |
|
3.2.2 重组质粒的鉴定 |
36-37 |
|
3.2.3 ITS序列分析 |
37-41 |
|
3.2.4 聚类分析 |
41 |
|
3.2.5 特异性引物的PCR检测 |
41-42 |
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3.2.6 特异性引物的双重PCR检测 |
42 |
|
3.2.7 特异性引物的特异性检测 |
42-43 |
|
3.3 小结 |
43-44 |
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第四章 香蕉穿孔线虫对不同杀线虫剂的敏感性研究 |
44-48 |
|
4.1 材料和方法 |
44 |
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4.1.1 实验材料和供试药剂 |
44 |
|
4.1.2 实验方法 |
44 |
|
4.2 结果与分析 |
44-47 |
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4.2.1 六种药剂的室内毒力测定结果 |
44-46 |
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4.2.2 六种药剂室内毒力测定的回归方程 |
46-47 |
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4.3 小结 |
47-48 |
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第五章 全文讨论 |
48-50 |
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5.1 香蕉穿孔线虫在胡萝卜片上的繁殖力研究 |
48 |
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5.2 香蕉穿孔线虫rDNA-ITS序列分析 |
48-49 |
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5.3 香蕉穿孔线虫对不同杀线虫剂的敏感性研究 |
49-50 |
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参考文献 |
50-55 |
|
致谢 |
55-56 |
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作者简历 |
56 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.152077 |
