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设施辣椒根腐病病原鉴定及检测技术研究

作者：朱辉 Publish: 2007-9-18 Hits:-

【中文题名】

设施辣椒根腐病病原鉴定及检测技术研究

【英文题名】

Studies on Identification and Detection of Root Rot Pathogen in Protected Capsicum

【学科专业】

植物病理学

【论文级别】

硕士论文

【投稿时间】

2007-9-18

【中关键词】

辣椒根腐病,辣椒疫霉,病原鉴定,酶联免疫吸附测定,斑点免疫吸附测定,

【英关键词】

Capsicum root rot,Phytophthora capsici,identification,I-ELISA,Dot-ELISA,

【分类导航】

农业科学>植物保护>病虫害及其防治>园艺作物病虫害及其防治>蔬菜病虫害>茄果类病虫害

【论文摘要】

近年来，由于设施辣椒栽培面积的连年扩大，轮作倒茬越来越困难，辣椒根腐病已经成为我国北方设施辣椒可持续发展的限制性因子之一。本论文针对辣椒根腐病病原不清，防治药剂不得当引起防效差的问题，开展了设施辣椒根腐病病原鉴定及检测技术研究。 1．对来自北京阳坊、山东寿光、辽宁瓦房店等地不同辣椒产区的根腐病病原进行了分离培养和鉴定，根据其形态特征、培养性状、生化特性以及致病性测定结果，将该病原菌鉴定为辣椒疫霉Phytophthora capsici Leonion。病原菌具孢子囊，形态变化大，椭圆形、近球形、卵形或不规则形，孢子囊平均大小为(11.8～46.6)×(11.2～24.5)μm，长宽比为1.4～1.8；乳突明显，呈半球形，一般单乳突，偶见双乳突，乳突长为1.7～5.91μm；病原菌不产生厚垣孢子；除辣椒外，人工接种还可侵染黄瓜、番茄、茄子，不侵染油菜和白菜；对孔雀石绿不敏感，能够利用淀粉。 2．运用免疫学技术，建立了检测辣椒疫霉的间接ELISA(I-ELISA)和斑点ELISA(Dot-ELISA)方法。本研究首先以辣椒疫霉菌体可溶性蛋白作为免疫原，通过免疫家兔制备了高效价的抗血清，并...

【论文题纲】

摘要	5-6
Abstract	6-11
第一章绪论	11-19
1.1 我国设施辣椒根腐病发生状况	11-12
1.1.1 辣椒根腐病的调查采样	11
1.1.2 设施辣椒根腐病发病症状	11-12
1.2 植物病原真菌检测技术研究进展	12-17
1.2.1 传统植物病原真菌检测技术	12-13
1.2.2 免疫学检测技术	13-15
1.2.3 分子生物学检测技术	15-17
1.3 本研究的目的和意义	17-18
1.4 本研究的试验设计路线	18-19
第二章辣椒根腐病病原的鉴定	19-27
2.1 试验材料	19-20
2.1.1 试验所用材料及设备	19
2.1.2 试验所用培养基	19-20
2.1.3 试验所用植物材料	20
2.2 试验方法	20-21
2.2.1 病原菌的分离和纯化	20
2.2.2 病原菌的致病性测定	20
2.2.3 病原菌的培养特征	20-21
2.2.4 病原菌的形态特征	21
2.2.5 病原菌对孔雀石绿的敏感性	21
2.2.6 病原菌对淀粉的利用能力	21
2.3 结果与分析	21-24
2.3.1 病原菌分离情况	21
2.3.2 病原菌的致病性测定结果	21-22
2.3.3 病原菌的培养特征结果	22
2.3.4 病原菌的形态特征观测结果	22-23
2.3.5 对孔雀石绿的敏感性测定结果	23-24
2.3.6 对淀粉的利用能力测定结果	24
2.3.7 病原菌的鉴定	24
2.4 本章小结	24-27
第三章辣椒根腐病病原多克隆抗体的制备	27-35
3.1 试验材料	27-28
3.1.1 试验所用材料和仪器	27
3.1.2 试验主要试剂的配制	27-28
3.2 试验方法	28-31
3.2.1 菌株培养及菌体可溶性蛋白提取	28-29
3.2.2 试验动物的选择及抗血清制备	29
3.2.3 抗血清的效价测定	29-30
3.2.4 透析袋的处理及使用	30
3.2.5 抗体的粗提	30
3.2.6 粗提抗体 IgG的纯化与浓度测定	30-31
3.2.7 SDS-PAGE电泳法检测抗体的纯度	31
3.3 结果与分析	31-34
3.3.1 菌体可溶性蛋白的浓度测定结果	31
3.3.2 抗血清的效价测定结果	31-33
3.3.3 纯化后抗体的浓度测定结果	33
3.3.4 抗体纯度的检测结果	33-34
3.4 本章小结	34-35
第四章辣椒根腐病病原间接 ELISA检测方法的建立	35-46
4.1 试验材料	35-36
4.1.1 试验所用试剂及溶液	35
4.1.2 试验所用菌株	35-36
4.2 试验方法	36-38
4.2.1 间接 ELISA基本操作程序	36
4.2.2 间接 ELISA最佳工作条件的确定	36-38
4.2.3 间接 ELISA法的稳定性检测	38
4.2.4 间接 ELISA法的特异性检测	38
4.2.5 间接 ELISA法对纯培养菌体蛋白灵敏度的检测	38
4.2.6 间接 ELISA法田间检测效果的评价	38
4.3 结果与分析	38-45
4.3.1 间接 ELISA法最佳工作条件的确定结果	38-42
4.3.2 间接 ELISA法的稳定性检测结果	42-43
4.3.3 间接 ELISA法的特异性检测结果	43-44
4.3.4 间接 ELISA法对纯培养菌体蛋白的灵敏度检测结果	44
4.3.5 间接 ELISA法田间检测效果的评价结果	44-45
4.4 本章小结	45-46
第五章辣椒根腐病病原 Dot-ELISA检测方法的建立	46-54
5.1 试验材料	46
5.1.1 试验所用材料	46
5.1.2 试验所用溶液及其配制	46
5.2 试验方法	46-48
5.2.1 间接Dot-ELISA基本操作程序	46-47
5.2.2 间接Dot-ELISA法最佳工作条件的确定	47-48
5.2.3 间接Dot-ELISA法的特异性检测	48
5.2.4 间接Dot-ELISA法对纯培养菌体蛋白的灵敏度检测	48
5.2.5 间接Dot-ELISA法田间检测效果的评价	48
5.3 结果与分析	48-52
5.3.1 间接Dot-ELISA最佳工作条件的确定结果	48-51
5.3.2 间接Dot-ELISA法的特异性检测结果	51
5.3.3 间接Dot-ELISA法对纯培养菌体蛋白的灵敏度检测结果	51-52
5.3.4 间接Dot-ELISA法的田间检测效果评价结果	52
5.4 本章小结	52-54
第六章结论与讨论	54-57
6.1 结论	54
6.2 讨论	54-57
6.2.1 关于辣椒根腐病的病原	54-55
6.2.2 关于免疫原	55
6.2.3 关于抗体的特异性	55
6.2.4 关于ELISA的显色系统	55-56
6.2.5 关于两种检测方法的比较	56-57
后记	57-58
参考文献	58-62
致谢	62-63
作者简历	63

【DOI】

LunWen.ID:2.2008.152078



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