| 【中文题名】 | 一个候选的肿瘤抑制基因PTPRO作用机制的初步研究 |
| 【英文题名】 | Study on the Molecular Mechanism of PTPRO-a Candidate Tumor Suppressor |
| 【学科专业】 | 细胞生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2007-10-10 |
| 【中关键词】 | 酪氨酸磷酸化,PTPRO,细胞周期,E2F1,p73,p21 |
| 【英关键词】 | PTPRO,cell cycle,E2F1 target gene,p73,p21, |
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| 【论文摘要】 |
蛋白酪氨酸磷酸化是真核生物很多重要生理过程的基础调控机制。酪氨酸磷酸化水平受蛋白酪氨酸激酶(PTKs)和蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)共同调控。其中蛋白酪氨酸磷酸酶在调控细胞生长、增殖、分化、转移、新陈代谢、细胞间通讯、免疫应答及存活等方面发挥至关重要的作用。酪氨酸磷酸酶功能下调与人类多种不同类型肿瘤的发生密切相关。
受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)是PTPs家族的成员之一,首次是在一项筛选肾小球足细胞特异性蛋白的研究中被发现并克隆出来的。PTPRO在鼠、人类等脊椎动物中是高度保守的。在人类基因组中,ptpro基因位于12p13.3-p13.2,包括6个不同mRNA变构体,其中2个主要的表达产物分别由全长PTPRO (PTPRO-FL )cDNA和截短型PTPRO (PTPROt) cDNA编码。PTPRO-FL在肾脏及脑组织中有较高的转录水平,而PTPROt则主要在B淋巴细胞和巨噬细胞中表达。
现在认为PTPRO是一个候选的肿瘤抑制基因,但是PTPRO发挥功能的机制还不清楚。在本实验中,我们发现PTPRO在G1/S期转化过程中是高表达的。这暗示了PTPRO在G1/S期转化过程中... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
4-5 |
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英文摘要 |
5-8 |
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引言 |
8-10 |
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一、研究背景和立题依据 |
8 |
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二、本文的研究内容和意义 |
8-10 |
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第一章 文献综述 |
10-22 |
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一、酪氨酸磷酸酶 |
10-16 |
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（一） PTPases 的分类和特性 |
10-11 |
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（二） PTPs的调控 |
11-12 |
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（三） PTPs调控细胞信号途径 |
12-13 |
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（四） PTPs的肿瘤抑制作用 |
13-15 |
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（五） 原癌PTPs |
15-16 |
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二、受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O |
16-18 |
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（一） PTPRO与肾小球功能的关系 |
17 |
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（二） PTPRO在神经组织发育中的作用 |
17 |
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（三） PTPRO抑制增殖和维持分化的性能 |
17-18 |
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（四） PTPRO在肿瘤中的潜在作用 |
18 |
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三、细胞周期调控和肿瘤 |
18-22 |
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（一） 细胞周期及其调控概述 |
18-19 |
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（二） 细胞周期调控因子 |
19-22 |
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第二章 实验材料和方法 |
22-29 |
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一、实验材料 |
22 |
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（一） 细胞系及培养试剂 |
22 |
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（二） 质粒 |
22 |
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（三） 实验设备及仪器 |
22 |
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二、实验方法 |
22-29 |
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（一） 分子克隆 |
22 |
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（二） DNA的琼脂糖电泳 |
22 |
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（三） 质粒的大量制备 |
22-24 |
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（四） 哺乳动物细胞培养 |
24 |
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（五） 磷酸钙瞬时转染 |
24-25 |
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（六） 脂质体转染 |
25 |
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（七） 荧光素酶分析 |
25 |
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（八） 细胞周期同步化 |
25-26 |
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（九） 流式细胞术分析 |
26 |
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（十） 哺乳动物细胞总RNA的提取 |
26-27 |
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（十一） 逆转录PCR |
27 |
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（十二） Real-Time PCR反应 |
27-29 |
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第三章 实验结果与分析 |
29-35 |
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一、PTPRO的表达具有周期性，在G1/S期上调 |
29-30 |
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（一） 细胞周期同步化 |
29-30 |
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（二） 检测PTPRO的表达情况 |
30 |
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二、PTPRO能够被E2F1 转录激活 |
30-32 |
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（一） 对PTPRO启动子上潜在的E2F1 结合位点的分析 |
30-31 |
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（二） Real-time PCR检测外源过表达 E2F1 对内源PTPRO的表达的影响 |
31 |
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（三） 荧光素酶报告基因实验检测外源过表达 E2F1 对PTPRO转录水平的影响 |
31-32 |
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三、PTPRO对细胞周期相关基因的影响 |
32-33 |
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四、PTPRO对p73 和p21 的影响 |
33-35 |
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第四章 讨论 |
35-37 |
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一、PTPRO的表达表现出周期性，在G1/S期表达最高 |
35 |
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二、PTPRO与细胞周期相关性研究 |
35-37 |
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（一） PTPRO受E2F1 转录激活 |
35-36 |
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（二） PTPRO对E2F1 靶基因cyclin E，cyclin A和p73，p21 的影响 |
36-37 |
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第五章 结论 |
37-38 |
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参考文献 |
38-43 |
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致谢 |
43 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.193887 |
