| 【中文题名】 | 组蛋白去乙酰化酶抑制剂筛选模型的建立及中药有效组分的筛选 |
| 【英文题名】 | The Establishment of Screening Models for Histone Deacetylase Inhibitors and Their Application in Screening of the Chinese Traditional Medicine Effective Components |
| 【学科专业】 | 细胞生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2006-8-10 |
| 【中关键词】 | 组蛋白去乙酰化酶抑制剂,药物筛选,p21~（WAF1CIP1）,组蛋白去乙酰化酶,, |
| 【英关键词】 | Histone deacetylase inhibitors,drug screening,p21~（WAF1/CIP1）,histone deacetylases, |
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| 【论文摘要】 | 基因的正常表达与调控是机体正常生长发育所必需的。组蛋白乙酰转移酶(histoneacetyltransferases, HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)可以通过调节组蛋白或转录因子的乙酰化状态来调节基因的活化或沉默。HAT引发染色质结构的松散,激活转录;而HDAC则可导致染色质集缩,并抑制特定靶基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)能抑制HDAC的活性,并通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长停滞、分化或凋亡,具有明显的抗肿瘤活性。
p21~(WAF1/CIP1)基因编码的蛋白是一种细胞周期依赖性蛋白激酶因子(CDKI),在细胞周期调控,细胞凋亡和细胞分化中都起着重要的作用。研究表明,p21~(WAF1/CIP1)基因作为一种重要的抑癌基因,其表达量的多少与肿瘤密切相关。p21~(WAF1/CIP1)基因的低表达,可造成异常细胞增生,有益于肿瘤的形成。在乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中,p21~(WAF1/CIP1)基因的表达明显降低。最近的研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制... |
| 【论文题纲】 |
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中文摘要 |
3-4 |
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英文摘要 |
4-7 |
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引言 |
7-8 |
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一、本论文的研究背景和立题依据 |
7 |
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二、本论文的研究内容和意义 |
7-8 |
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第一章 文献综述 |
8-22 |
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一、组蛋白的乙酰化和去乙酰化与基因表达调控 |
8-10 |
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(一) 组蛋白乙酰化与基因表达调控 |
8 |
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(二) HAT 和 HDAC |
8-9 |
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(三) CoA 和 CoR |
9 |
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(四) HDAC 和 HAT 在癌症发病机制的作用及其对癌症治疗的启迪 |
9-10 |
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二、组蛋白去乙酰化酶 |
10-15 |
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(一) 组蛋白去乙酰化酶的分类 |
10-11 |
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(二) 组蛋白去乙酰化酶的生物学功能 |
11-15 |
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1. 组蛋白去乙酰化酶(HDAC)和转录辅抑制子 |
11-12 |
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2. 组蛋白去乙酰化酶相关蛋白 |
12-13 |
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3. Sirtuins 蛋白复合物及其生物学功能 |
13-14 |
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4. 组蛋白去乙酰化酶与癌症 |
14-15 |
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三、组蛋白去乙酰化酶抑制剂的作用机制及分类 |
15-17 |
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(一) 组蛋白去乙酰化酶抑制剂的作用机制 |
16 |
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(二) 组蛋白去乙酰化酶抑制剂的分类 |
16-17 |
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四、p21 的研究进展 |
17-19 |
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(一) p21~(WAF1/CIP1) 的克隆 |
17 |
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(二) p21 的作用 |
17-18 |
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(三) p21 的作用机制 |
18-19 |
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五、药物筛选 |
19-22 |
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(一) 药物筛选模型的研究进展 |
19-20 |
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(二) 分子靶标的选取 |
20-22 |
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第二章 实验材料和方法 |
22-28 |
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一、实验材料 |
22 |
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(一) 细胞培养及其培养试剂 |
22 |
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(二) 原始质粒 |
22 |
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(三) 中药组分 |
22 |
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(四) 实验设备及仪器 |
22 |
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二、实验方法 |
22-28 |
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(一) 质粒构建 |
22-23 |
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(二) 质粒的大量制备 |
23-24 |
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(三) 哺乳动物细胞培养 |
24 |
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(四) 哺乳动物细胞转染(磷酸钙瞬时转染) |
24-25 |
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(五) 相对荧光素酶活性(RLA)测定 |
25 |
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(六) 绿色荧光蛋白报告基因检测 |
25 |
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(七) 稳定转染细胞系的筛选 |
25-26 |
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(八) 哺乳动物细胞基因组DNA 的提取 |
26-27 |
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(九) 中药组分的初筛 |
27-28 |
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第三章 结果与分析 |
28-38 |
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一、质粒构建及验证 |
28-31 |
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(一) 荧光素酶报告基因质粒的构建及验证 |
28-29 |
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(二) 绿色荧光蛋白报告基因质粒的构建及验证 |
29-31 |
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二、组蛋白去乙酰化酶抑制剂 TSA 对p21~(WAF1/CIP1) 启动子的影响 |
31-33 |
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(一) 检测时间的确定 |
31 |
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(二) 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 TSA 的最佳处理浓度 |
31-32 |
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(三) 组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA 对pZS-p21-GFP 绿色荧光蛋白报告基因质粒的影响 |
32-33 |
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三、稳定转染细胞系的建立及验证 |
33-36 |
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(一) pCI-p21-Luc 荧光素酶模型的验证 |
33-34 |
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(二) pZS-p21-GFP 绿色荧光蛋白模型的验证 |
34-36 |
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四、中药组分的初筛 |
36-38 |
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第四章 讨论 |
38-41 |
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一、筛选模型的选择 |
38 |
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二、药物靶标的选择 |
38-39 |
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三、稳定转染细胞系的筛选 |
39 |
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四、组蛋白去乙酰化酶抑制剂的筛选 |
39-41 |
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第五章 结论 |
41-42 |
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参考文献 |
42-47 |
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致谢 |
47-48 |
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在学期间公开发表论文及著作情况 |
48 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.172005 |
