| 【中文题名】 | 小麦白粉菌诱导早期的基因表达分析 |
| 【英文题名】 | Gene Expression Analysis in Early Stage Induced by Powdery Mildew in Wheat |
| 【学科专业】 | 生物化学与分子生物学 |
| 【论文级别】 | 硕士论文 |
| 【投稿时间】 | 2005-9-5 |
| 【中关键词】 | 小麦,近等基因系,抗白粉病,SSH文库,基因表达分析,抗病机制 |
| 【英关键词】 | Triticum aestivum,near isogenic lines （NILs）,powdery mildew,SSH library,gene expression analysis,resistant mechanism, |
| 【分类导航】 | 农业科学>植物保护>病虫害及其防治>农作物病虫害及其防治>禾谷类作物病虫害>麦类病虫害 |
| 【论文摘要】 | 由白粉菌Erysiphe graminis DC引起的小麦白粉病是我国小麦生产中的严重病害。它可导致大规模的粮食减产,严重地威胁着我国的粮食安全。因此,迫切需要应用现代分子生物学的方法从整体水平上深入研究抗病机理,以寻找提高抗性的行之有效的方法。
在本研究中,为了从整体水平上研究抗病相关基因的表达情况,我们利用抑制差减杂交的方法构建了小麦抗白粉病的cDNA文库。以诱导的Mardler/Bainong3217 BC_5F_7近等基因系为实验方,以其轮回亲本未诱导的Bainong3217为驱动方。根据本实验室李爱丽等对白粉菌侵染小麦细胞学的研究(Plant Pathology,2005,In pressed)以及相关文献我们确定了0.5、1、3、6、12、16、20hai(hours after inoculation,接种后小时)7个时间点为取材时间点。所构建SSH文库中共保存了4224个克隆,提取了864个质粒,将质量好的667个质粒进行测序,共获得637条质量好的ESTs(Expression Sequence Tag,表达序列标签)。在GenBank上用BLASTx结合BLASTn软件对其进行... |
| 【论文题纲】 |
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摘要 |
6-7 |
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ABSTRACT |
7-10 |
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第一章 文献综述 |
10-27 |
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1．1 植物抗病性研究概况 |
10-19 |
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1．1．1 植物的抗病性 |
10-11 |
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1．1．2 植物抗病基因的克隆及其结构特点 |
11-14 |
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1．1．3 植物抗病机制及抗病信号传导路径 |
14-19 |
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1．2 小麦抗白粉病基因的研究进展 |
19-22 |
|
1．2．1 小麦抗白粉病基因的研究背景 |
19-20 |
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1．2．2 小麦抗白粉病基因克隆的研究现状 |
20 |
|
1．2．3 小麦抗白粉病机制的研究 |
20-22 |
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1．3 抑制差减杂交的原理和应用 |
22-25 |
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1．3．1 原理 |
22 |
|
1．3．2 技术评价 |
22-23 |
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1．3．3 SSH技术的应用 |
23-25 |
|
1．4 立题意义和技术路线 |
25-27 |
|
1．4．1 立题意义 |
25-26 |
|
1．4．2 技术路线 |
26-27 |
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第二章 材料与方法 |
27-40 |
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2．1 植物材料及处理 |
27-28 |
|
2．2 RNA的提取 |
28-29 |
|
2．2．1 总RNA的提取 |
28-29 |
|
2．2．2 mRNA的纯化 |
29 |
|
2．3 SSH文库的构建 |
29-35 |
|
2．3．1 第一链cDNA合成 |
29 |
|
2．3．2 第二链cDNA合成 |
29-30 |
|
2．3．3 Rsa Ⅰ酶切 |
30-31 |
|
2．3．4 接头的连接 |
31-33 |
|
2．3．5 第一次杂交 |
33 |
|
2．3．6 第二次杂交 |
33-34 |
|
2．3．7 两次PCR扩增 |
34-35 |
|
2．4 PCR产物的连接转化 |
35 |
|
2．5 差减差异片段cDNA文库的构建 |
35-36 |
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2．6 插入片段检测 |
36-37 |
|
2．6．1 质粒的提取 |
36 |
|
2．6．2 PCR扩增克隆的插入片段 |
36-37 |
|
2．7 测序 |
37-38 |
|
2．7．1 测序质粒的提取 |
37 |
|
2．7．2 测序反应 |
37-38 |
|
2．7．3 测序反应产物纯化 |
38 |
|
2．8 测序结果分析 |
38-40 |
|
第三章 结果与分析 |
40-57 |
|
3．1 RNA的检测 |
40 |
|
3．2 酶切结果 |
40-41 |
|
3．3 接头连接效率 |
41 |
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3．4 抑制性差减杂交结果 |
41-42 |
|
3．5 差减杂交效率检测 |
42-43 |
|
3．6 差减文库库容和插入片段的PCR扩增 |
43-44 |
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3．7 测序结果 |
44 |
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3．8 序列分析和功能注释 |
44-53 |
|
3．9 与诱导24、48、72小时的差减文库的比较 |
53-57 |
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3．9．1 各类功能的基因所占比例的比较 |
53-55 |
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3．9．2 从抗病反应全过程来看两个差减库的差异 |
55-57 |
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第四章 讨论 |
57-60 |
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4．1 各种胁迫反应的共性 |
57 |
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4．2 抗白粉病识别机制初探 |
57-58 |
|
4．3 SA信号途径在抗病反应作用中的可能性 |
58 |
|
4．4 乙烯在抗病反应作用中的可能性 |
58 |
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4．5 NPR1在抗病反应作用中的意义 |
58-59 |
|
4．6 与泛素降解相关的可能机制 |
59-60 |
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第五章 结论 |
60-61 |
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参考文献 |
61-69 |
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致谢 |
69-70 |
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作者简历 |
70 |
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| 【DOI】 | LunWen.ID:2.2008.151090 |
